杨春秀，胡建娥，伞景辉，陈建斌

    (1.遵义医学院附属医院 血液内科，贵州 遵义 563099；2.重庆市三峡中心医院 检验科，重庆 404100；3.重庆医科大学附属第一医院 血液内科，重庆 400016)

    临床医学研究

    Notch4受体激活对K562细胞增殖的影响及机制研究

    杨春秀1，胡建娥2，伞景辉1，陈建斌3

    (1.遵义医学院附属医院 血液内科，贵州 遵义 563099；2.重庆市三峡中心医院 检验科，重庆 404100；3.重庆医科大学附属第一医院 血液内科，重庆 400016)

    目的 研究Notch4受体激活后对慢性髓系白血病细胞株K562增殖的影响及可能的作用机制。方法 用脂质体分别将携带Notch4胞内段(ICN4)的质粒pcDNA 3.1-ICN4及空载体质粒pcDNA 3.1转染入K562细胞，用G418筛选出稳定表达ICN4的细胞株。观察K562细胞ICN4转染后的形态变化，MTT法分析细胞增殖水平，RT-PCR法和Western blot法检测Notch4受体、Hes1、Hey1下游靶基因 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果 筛选出稳定表达ICN4的细胞株K562/ICN4细胞，与对照组及空载体组比较，ICN4转染组K562细胞数量减少，胞膜透亮度减小，核染色质固缩，核浆比例减低；ICN4转染后K562细胞生长受抑(P1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 慢性髓系白血病细胞株K562细胞、DH5α大肠杆菌及空载体质粒pcDNA 3.1由本室常规保存。pcDNA 3.1-ICN4质粒由重庆医科大学组织与胚胎教研室李芳菲博士惠赠。RPMI 1 640培养基、胎牛血清、质粒提取试剂盒、RNA提取及逆转录PCR试剂盒、脂质体LipofectamineTM2 000等分别购自Invitrigen公司，天根生物、Roche、Hyclone、TaKaRa公司及碧云天生物技术研究所；MTT购自Sigma；Notch4山羊抗人单克隆抗体、Hes1兔抗人单克隆抗体、Hey1小鼠抗人单克隆抗体购自Santa cruz，辣根过氧化物酶标记二抗购自北京中杉。仪器：细胞培养箱(日本SANYO公司，型号：RKJ-2)，酶标仪(日本UNRISE公司)，倒置相差显微镜(Olympus公司，型号：CKC-TR-2 W)，PCR仪(Thermo Hybaid公司)，流式细胞仪(美国Becton-Dickinson公司，型号：FACS Calibur)，凝胶呈像系统(美国BIO-RAD公司) ......