周 林，邱 敏，徐亚沙，鲁艳柳，陆远富

    (遵义医学院 基础药理教育部重点实验室暨特色民族药教育部国际合作联合实验室，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    Caco-2细胞模型研究淫羊藿苷的吸收转运

    周 林，邱 敏，徐亚沙，鲁艳柳，陆远富

    (遵义医学院 基础药理教育部重点实验室暨特色民族药教育部国际合作联合实验室，贵州 遵义 563099)

    目的 采用Caco-2细胞模型，研究淫羊藿苷(ICA)吸收转运特性。方法 成功制备Caco-2细胞模型后，分为空白组、ICA组、氢离子组、无钠离子组、ATP抑制剂组，给予ICA(10 μmol/L)3 h后，采用UPLC-MS分析，比较刷状缘侧、基底侧及细胞样本中ICA及淫羊藿次苷II(ICS II)的含量，观察不同条件对ICA、ICS II吸收的影响。结果 与ICA组相比，氢离子组、无钠离子组及ATP抑制剂组刷状缘侧ICA含量显著降低(P1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器 淫羊藿苷标准品，中国药品生物制品检定所，批号：110737-200415；淫羊藿次苷标准品，中国食品药品检定研究院，批号：X45Q-NY8F；大豆苷元，南京标科生物科技有限公司；淫羊藿苷，南京标科生物科技有限公司，批号：111852-201102；色谱纯乙腈、甲醇，美国Dikmapure公司；Caco-2细胞，中国昆明细胞库提供；DMEM培养基，美国HyClone公司；胎牛血清，美国Gibco有限公司；青霉素/链霉素，中国索莱宝科技有限公司；D-hanks缓冲液，中国索莱宝科技有限公司。

    Q-Exactive四极杆-轨道阱质谱色谱联用仪，美国Thermo科技有限公司；Millicell-ERS细胞电阻仪，北京明阳科华生物科技有限公司；24孔transwell细胞培养板，康宁生命科学产品有限公司；细胞计数仪，艾力特国际贸易有限公司；CO2培养箱，美国Thermo科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 Caco-2细胞模型的制备 将Caco-2细胞浓度调整到8×104个/cm2，接种于24孔Transwell小室，置37 ℃培养箱中，21 d左右分化形成。当电阻值大于500 Ω·cm2、表观渗透率低于1×10-6cm/s时，表明细胞单层具有紧密性和完整性，可作为小肠吸收实验的体外模型[9-10]。实验前，弃去培养液，分别向刷状缘侧(apical side，AP)和基底侧(basolateral side，BL)加入37 ℃的D-hanks缓冲液漂洗细胞3次 ......