刘爱东，王 箐，田 琳，刘晓红，曾俊伟

    (1.遵义医学院 生理学教研室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 机能学实验室，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    外源性硫化氢对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

    刘爱东1，王 箐2，田 琳2，刘晓红1，曾俊伟1

    (1.遵义医学院 生理学教研室，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院 机能学实验室，贵州 遵义 563099)

    目的 观察硫氢化钠(NaHS,外源性的H2S供体)对低糖和高糖环境下的人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。方法 传代培养人近曲肾小管上皮细胞，细胞用无血清培养基同步化24 h后，将细胞分为8组：低糖对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖、低糖+不同剂量NaHS组(50、100、200 μmol/L)、高糖组(40 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+不同剂量NaHS组(50、100、200 μmol/L)。将细胞置于37 ℃，5%CO2培养箱中刺激培养24、48 h，收集细胞。用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果 ①刺激培养24、48 h，低糖+不同剂量NaHS组HK-2细胞凋亡率明显低于低糖对照组(P1 材料与方法

    1.1 材料与仪器 人近曲肾小管上皮细胞株(HK-2)购于上海生命科学院；NaHS购于Sigma公司；DMEM培养基和FBS购于Hyclone公司；青链双抗购于上海生工生物工程有限公司；D-葡萄糖购于阿拉丁试剂(上海)有限公司，DMSO(二甲基亚砜)购于Sigma公司；Annexin V-FITC/PI试剂盒购于上海贝博生物公司。

    细胞培养箱(美国Thermo，型号:Labserv CO-150)；超净工作台(苏州安泰科技有限公司)；离心机(1.德国Eppendorf公司，型号:5418)；流式细胞仪(美国BD Biosciences，型号:BD FACSVerseTM)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 取冻存的HK-2细胞，37 ℃快速解冻后，161.0g离心5 min，用DMEM培养基清洗2次后用DMEM基础培养基重悬后再离心；加入完全培养基进行培养，每天换1次培养基；待细胞长满后调整细胞浓度为2×105个/mL，接种于6孔培养板，每孔1 mL，37 ℃，5% CO2培养箱内培养24 h。

    1.2.2 实验分组与处理 待同步化培养24 h后，将细胞分为8 组：①低糖对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)；②低糖+NaHS低剂量组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+50 μmol/L NaHS)；③低糖+NaHS中剂量组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+100 μmol/L NaHS)；④低糖+NaHS高剂量组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+200 μmol/L NaHS)；⑤高糖组(40mmol/L D-葡萄糖)；⑥高糖+NaHS低剂量组(40 mmol/L D-葡萄糖+50 μmol/L NaHS)；⑦高糖+NaHS中剂量组(40 mmol/L D-葡萄糖+100 μmol/L NaHS)；⑧高糖+NaHS高剂量组(40 mmol/L D-葡萄糖+200 μmol/L NaHS)；每组设3个复孔 ......