刘 为，张 琳，田 伟，邓胜利

    (1.遵义医学院 麻醉学系 贵州省麻醉与器官保护重点实验室，贵州 遵义 563099；2.遵义市播州区人民医院 麻醉科，贵州 遵义 563100；3 遵义医学院附属医院 麻醉科， 贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    Urocortin I后处理对缺氧/复氧大鼠心肌细胞线粒体膜电位及活性氧自由基的影响

    刘 为1，张 琳1，田 伟2，邓胜利3

    (1.遵义医学院 麻醉学系 贵州省麻醉与器官保护重点实验室，贵州 遵义 563099；2.遵义市播州区人民医院 麻醉科，贵州 遵义 563100；3 遵义医学院附属医院 麻醉科， 贵州 遵义 563099)

    目的 观察Urocortin I后处理对缺氧/复氧大鼠心肌细胞线粒体膜电位及活性氧自由基的影响。方法 利用ALC-HP型离体心脏灌注装置分离成年大鼠心肌细胞，将培养1 d后存活状态良好的细胞随机分为正常组(N组)、缺氧/复氧组(HR组)、UrocortinⅠ后处理组(Ucn I组)、5-羟葵酸拮抗Urocortin Ⅰ组(5-HD+UcnⅠ组)。N组：37 ℃培养箱中持续培养150 min；HR组：缺氧40 min后，复氧110 min；Ucn Ⅰ组：缺氧40 min复氧10 min，然后Ucn Ⅰ处理30 min再复氧70min；5-HD+Ucn Ⅰ组：特异性线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)拮抗剂5-HD处理10 min后，在含Ucn Ⅰ的培养基中处理30 min，余处理同Ucn Ⅰ组。各组于复氧末加入荧光探针并用倒置相差显微镜观察细胞线粒体膜电位(MMP)及活性氧自由基(ROS)的变化。结果 ①MMP变化：N组心肌细胞MMP较其余各组高(P0.05)。②ROS变化：N组心肌细胞ROS荧光强度低于其余各组(P1 材料与方法

    1.1 实验动物 健康清洁级雄性SD大鼠20只，周龄为16～20周，体重约200 g左右，由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供。许可证号：SCXK(渝)2012-0005。

    1.2 试剂与仪器 UrocortinⅠ、5-羟葵酸、M199培养基、牛血清白蛋白(BSA)、Ⅱ型胶原酶、乙二醇双四乙酸(EGTA)、层黏连蛋白(Laminin) 均从美国Sigma公司购置，活性氧检测试剂盒(碧云天生物技术公司，中国)、活体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光测定试剂盒(杰美基因医药科技有限公司，中国)；ALC-HP型离体心脏灌注装置(北京吉安得尔科技有限公司，中国)、超净台(苏州净化设备有限公司 ......