张 琳，周雯静，黄建廷，喻 田

    (贵州省麻醉与器官保护基础研究重点实验室，贵州 遵义 563099)

    基础医学研究

    缺血后处理心肌细胞线粒体比较蛋白质组学的研究

    张 琳，周雯静，黄建廷，喻 田

    (贵州省麻醉与器官保护基础研究重点实验室，贵州 遵义 563099)

    目的以大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，利用蛋白质组学对纯化的大鼠心肌细胞线粒体进行分析和鉴定，探讨缺血后处理大鼠心肌细胞线粒体蛋白表达的变化。方法24只大鼠随机分为正常组(Normal，Nor)、缺血再灌注损伤组(Control，Con)、缺血后处理组(ischemic postconditioning，IPO)、5-羟葵酸拮抗缺血后处理组(5-hydroxydecanoate，5-HD+IPO)，利用Langendorff灌注装置构建各组大鼠离体心脏模型。以Nycodenz密度梯度离心法分离大鼠心肌线粒体，通过Western blot方法检测其纯度，提取各组线粒体蛋白，进行2D-DIGE分离，分析差异表达蛋白，进行MALDI-TOF-MS鉴定。结果与Nor组比较，Con组NADH脱氢酶亚基(NDUFA10)表达水平降低3.84倍；IPO和Con组比较：NDUFA10和琥珀酸脱氢酶-黄素蛋白(SDHA)的蛋白表达水平分别减少3.33倍和1.68倍。与IPO组比较，5-HD+IPO组的SDHA表达水平升高1.65倍。结论心肌缺血再灌注损伤降低了NDUFA10蛋白的活性，可能在缺血后处理线粒体NADH呼吸链稳定的维持过程中发挥作用，SDHA蛋白和线粒体敏感性K+通道(mitoKATP)可能同时在缺血后处理内源性保护机制中具有作用。

    缺血后处理；线粒体；蛋白质组学；2D-DIGE；质谱分析；心肌保护

    缺血后处理( ischemic postconditioning,IPO)，是指心肌缺血后，进行多次短时间再灌注/缺血的循环，再进行长时间的再灌注，从而产生减轻心肌缺血再灌注的损伤作用[1]。已有研究明确，与缺血预处理相似，在心脏再灌注早期进行缺血后处理可减轻心肌缺血再灌注造成的损伤，且在临床上具有应用价值[2]。心脏需氧量大，且主要依靠底物的有氧氧化提供能量，线粒体进行氧化磷酸化产生其所需约95%的ATP。IPO内源性保护机制与心肌线粒体存在着密切的关系，因而线粒体在IPO中的作用，对理解IPO的保护机制具有重要意义[3-6]。利用蛋白质组学方法来研究心肌细胞线粒体在不同条件下的蛋白质表达变化，观察心肌细胞线粒体蛋白在缺血再灌注损伤(ischemical reperfusion injury,IRI)及IPO条件下表达的改变 ......