李利生，陆 阳，杨斯雷，石京山

    (1.遵义医学院基础药理教育部重点实验室及特色民族药国际合作联合实验室，贵州 遵义 563099；2.上海交通大学医学院药学系 化学教研室，上海 200025；3.奥林巴斯(中国)有限公司，北京 100015)

    技术与方法

    一种神经元轴突变性的量化分析方法

    李利生1，陆 阳2，杨斯雷3，石京山1

    (1.遵义医学院基础药理教育部重点实验室及特色民族药国际合作联合实验室，贵州 遵义 563099；2.上海交通大学医学院药学系 化学教研室，上海 200025；3.奥林巴斯(中国)有限公司，北京 100015)

    目的建立一种神经元轴突变性的量化分析方法。方法采用Aβ25-35(10-7、10-6、10-5mol/L)诱导的大鼠原代海马神经元轴突变性模型，经神经元特异性标记蛋白β Ⅲ Tubulin免疫荧光染色获得神经元形态学荧光图像。荧光图像经二维消卷积和二元化处理，将荧光标记的神经元区域转变为黑色并测量其面积，即为神经元总面积。应用ImageJ软件的颗粒分析功能测量轴突变性产生的片段和颗粒面积，并计算其占神经元总面积的百分比，即可获得神经元轴突变性的量化数据，命名为变性指数(degeneration index，DI)。Western blot测定突触后致密蛋白95(postsynaptic density 95，PSD95)和突触素( synaptophysin，SYN)蛋白变化。Pearson法分析DI与PSD95、SYN变化的相关性。结果免疫荧光染色结果显示Aβ25-35可诱导海马神经元轴突变性，DI显著高于对照组并呈剂量依赖性，PSD95和SYN蛋白水平显著降低，与DI变化呈显著正相关。结论本方法可获得准确的神经元轴突变性的量化数据。

    神经元；轴突变性；Aβ25-35；变性指数；免疫荧光；消卷积

    神经元轴突的功能是将神经冲动通过突触传递到另一个神经元或所支配的细胞上，轴突结构和功能的完整性是神经系统功能的基础。轴突变性是中枢神经系统退行性疾病、外伤、感染、神经系统免疫性疾病的常见形态学表现，是神经系统疾病病理变化的基本特征之一[1]，表现为神经元形态改变、线粒体膜电位丢失、轴突转运功能受损、ATP生成减少、钙内流增加、神经丝降解和微管断裂等[2]。在体外实验研究中，常采用贫营养、Aβ、缺氧等措施复制神经元轴突损伤模型。尽管导致轴突变性的原因甚至机制不尽相同，但形态学改变基本一致，表现为轴突断裂、颗粒化，呈念珠样，甚至降解消失并累及胞体[3] ......