郑春辉，杨永敏，吴春贵，梁凯乾，田晓红，魏妮娜

    (遵义医学院 珠海校区生物工程系，广东 珠海 519041)

    虎耳草(SaxifragastoloniferaCurtis)，别名：老虎耳、佛耳草等，属于虎耳草目，虎耳草科，虎耳草属。其是贵州省重要的民族苗药药材，具有保肝、抗炎、镇咳等功效[1]，其含有岩白菜素、贝格宁、原儿茶酸、没食子酸和槲皮素等主要成分[2]。研究表明虎耳草不仅具有抗肿瘤活性[3]，还具有抗菌、抗氧化活性[4]，在贵州民间广泛用于治疗湿疹、中耳炎、痔疮肿痛等疾病[5-6]，得到了医生和患者的广泛认同。虎耳草在我国多个地区均有生长，但是品质却参差不齐。有研究表明，贵州各地虎耳草药材中岩白菜素含量在0.4%左右，远高于《贵州省中药材、民族药质量标准》中规定的最低含量限度0.080%，而且没食子酸的平均含量为0.121%，虎耳草的质量较好[7]。一直以来，虎耳草原材料主要依靠野生资源，随着需求量增加，野生虎耳草产量已不能满足市场的需求，从而导致在收购时出现品种混杂情况，严重影响到了药材的质量稳定和临床用药的安全。

    过去常用的药材性状鉴定方法和理化鉴定方法等传统的手段在操作过程中，要么可靠性差，要么操作繁琐。随着分子生物学的发展，多种分子标记技术，如内部简单重复序列标记(inter simple sequence repeat,ISSR)[8]、扩增片段长度多态性 (amplified fragment length polymorphism,AFLP)[9]、随机扩增多态性DNA (random amplified polymorphic DNA,RAPD )[10]和内部转录间隔区 (inter nal transcribed spacer,ITS)[11]等均被运用于药用植物的鉴定研究。其中ITS 序列分析技术凭借方便、可靠和准确等优点受到人们的推崇和关注[12]。ITS序列是rDNA转录间隔区序列，分为ITS1和ITS2，其作为非编码区，承受自然选择的压力小，长度虽然较为保守，但核苷酸序列的变化较大，可以为研究提供较为详尽的遗传学信息。DNA条形码技术是Hebert在2003年通过一段或几段很短通用的标准目的基因DNA序列，对物种的分析及鉴定的一门技术[13]。现已成为鉴定生物界发展最快速的研究方向之一[14-16]。DNA条形码不仅准确性高，而且操作简单快速高效，同时可利用信息平台和互联网实现统一管理和共享[17]。中国学者首次提出将ITS2序列作为药用植物标准DNA条形码，并建立了以ITS2序列为主的药用植物类中药材DNA条形码鉴定体系 ......