孕激素对人子宫内膜样癌JEC细胞ER亚型、PR亚型及p57kip2表达的影响
高浓度,细胞周期,1材料与方法,2结果,3讨论
刘蒙蒙,孙小杰,周正平,袁 丹,刘俊江(1.遵义医学院 病理学教研室,贵州 遵义 563099;2.滨州市人民医院 病理科,山东 滨州 256610;3.遵义医学院 基础医学院电镜室,贵州 遵义 563099)
子宫内膜癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,在西方发达国家高居女性恶性肿瘤之首[1]。目前在发展中国家,由于人群平均寿命的延长以及激素替代疗法的广泛应用,子宫内膜癌的发病率也呈上升趋势[2]。子宫内膜癌按流行病学特征、临床特点等分为 I型(雌激素依赖型)、II型(非雌激素依赖型),I型主要病理学类型为子宫内膜样癌(endometrioid carcinoma,EC),属于雌激素依赖性肿瘤,其发病因素与长期缺乏孕激素对抗的高水平雌激素刺激密切相关。孕激素可通过与孕激素受体(progesterone receptor,PR)结合后,下调雌激素受体(estrogen receptor,ER)的表达,对抗ER介导的雌激素促进细胞增殖的作用,使增生的子宫内膜向分泌期转化,从而避免子宫内膜癌的发生与发展[3-6]。
在哺乳动物体内,细胞在正常细胞周期的调控下有序增殖,一旦细胞周期调控紊乱,则引起细胞无序增殖,甚至导致肿瘤的发生。通过各种正负调控因子的协同调节,细胞周期得以正常进行。其中,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(cyclin-dependent kinase inhibitors,CKI)是细胞周期进程的负调控因子,包括两大家族,其中Cip/Kip家族包括p57kip2、p21kip1、p27kip1[7]。p57kip2被最晚发现,在许多肿瘤中表达降低[8-10],但目前在子宫内膜癌中的研究较少。本研究拟通过对体外培养的JEC细胞(中分化EC细胞)进行孕激素干扰后,用MTT法观察JEC细胞的生长曲线,在光镜、电镜下观察JEC细胞的生长情况及超微结构变化,用免疫蛋白印迹(Western Blot,WB)法检测JEC细胞中ER亚型、PR亚型及p57kip2蛋白的表达,以探讨孕激素对细胞周期进程的干扰调控,以及对EC发展的影响。
1 材料与方法
1.1 细胞株 人EC中分化JEC细胞株(遵义医学院微生物学教研室)。
1.2 主要试剂 孕酮购于北京华迈科公司,MTT粉剂购于北京Solarbio公司,WB相关试剂购于上海碧云天生物研究所,鼠抗人β-actin单克隆抗体购于上海碧云天生物研究所,ER两种亚型、PR两种亚型、p57kip2鼠抗人单克隆抗体购于美国SantaCruz公司,荧光山羊抗鼠抗体购于美国LI-COR公司 ......
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