裴美娟，王 恺,2，张 婷 ,3，涂 悦，耿 俐

    (1.武警后勤学院附属医院 脑科中心，天津 300162；2.中国人民解放军91428部队 卫生队，浙江 宁波 315456；3.中国人民解放军第三医院 医务处，陕西 宝鸡 721000；4.中国人民解放军第三医院 妇产科，陕西 宝鸡 721000)

    脑梗死作为常见的一种脑血管疾病，近年来发病率逐渐升高，其较高的致残率和致死率给患者及社会带来了沉重负担，早期干预对于患者的病情控制及预后有着重要意义[1-2]。多项研究证实，应用白藜芦醇可有效改善患者脑水肿和神经功能损伤症状，但具体机制尚未形成定论[3-4]。线粒体是细胞能量代谢的重要场所，线粒体的功能障碍与细胞毒性脑水肿和神经功能损伤程度密切相关，这提示线粒体可能是白藜芦醇发挥神经保护作用的重要靶点之一[5-6]。本研究拟通过构建小鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，探讨白藜芦醇对脑水肿的影响，并检测线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)拷贝数以及线粒体生物合成相关基因表达的变化，从而为探索白藜芦醇治疗脑梗死的机制提供更多基础支持。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 雄性C57BL/6小鼠36只，25～30 g，购于军事医学科学院动物实验中心(动物合格证号：0033432)。

    1.2 试剂与仪器 组织DNA/总RNA共提取试剂盒、cDNA合成试剂盒(北京天根生化科技有限公司)，real-time PCR试剂盒(康为世纪公司)，白藜芦醇(501-36-0(纯度≥98%)，武汉远成共创科技有限公司)，real-time PCR仪(美国ABI公司)，小动物麻醉机、台式动物手术显微镜(深圳瑞沃德公司)

    1.3 实验方法

    1.3.1 白藜芦醇的配制 将2 g白藜芦醇溶于100 mL生理盐水中，4 ℃保存。

    1.3.2 实验分组及术前准备 将36只C57BL/6雄性小鼠随机分为3组，即对照组(C组)、大脑中动脉栓塞组(MCAO组)和白藜芦醇组(R组)，每组12只。MCAO组和R组采用线栓法构建大脑中动脉栓塞模型：以400 mL/min的3%浓度异氟烷进行诱导麻醉，随后改为2%浓度持续麻醉。

    1.3.3 MCAO模型制备 取颈正中切口，手术显微镜10倍视野下分离并暴露右侧颈内、外动脉分叉处。首先，结扎颈外动脉以防止插线时将线栓插入颈外动脉而未进入大脑中动脉。其次，在颈内动脉上打1个活结但不结扎，为稍后固定线栓做准备。然后，在颈内、外动脉分叉处远端的颈总动脉上结扎以阻断血流 ......