宫黎明，周满红，廖富团，徐绍华，罗克燕，董世桃，程宇凌，杨智敏

    (1.遵义医学院附属医院 生殖医学中心，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院附属医院 急诊科，贵州 遵义 563099；3.遵义医学院附属医院 体检中心，贵州 遵义 563099)

    人类白细胞抗原G(human leucocyte antigen-G,HLA-G)是非经典的HLA-I类分子，其编码基因及分子结构与经典HLA-I类分子相似。1987年首次报道HLA-G，现已知7个亚型中，1-4亚型是膜结合型蛋白，5-7 亚型是可溶性蛋白。HLA-G5和部分HLA-G1膜外可溶性片段组成可溶性HLA-G(sHLA-G)[1-2]。近年研究发现sHLA-G的检测有可能成为生殖医学实验室胚胎选择的无创性指标。HLA-G5具有诱导免疫耐受作用，因此在移植免疫、肿瘤免疫和生殖免疫领域备受关注，具有广泛的基础研究和临床应用前景[3-5]。

    人羊膜间充质干细胞(human amnion drived mesenchymal stem cells，hAD-MSCs)易获得，无侵入性，伦理问题少，具有低免疫原性和扩增能力强等优势，近来引起国内外学者研究热潮。其多向分化潜能及诱导免疫耐受的能力更是受到普遍关注[6-8]。MSCs在体内外一定条件下可以适量分泌HLA-G5[9]，我们将完整HLA-G5基因转入真核表达载体，构建高效感染的慢病毒包装系统，并感染hAD-MSCs，用于后续探讨HLA-G5在hAD-MSCs体内外诱导免疫耐受中的作用和机制，或HLA-G5修饰的hAD-MSCs直接移植治疗疾病模型，并探索将hAD-MSCs作为细胞反应器制备HLA-G5的可行性。

    1 材料与方法

    1.1 材料和试剂 经知情同意后，无菌采集遵义医学院附属医院产科足月剖宫产胎盘，剥离羊膜后按先前的实验程序分离人羊膜间充质干细胞[6]。pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP病毒质粒由上海吉凯基因化学技术有限公司提供，质粒抽提试剂盒购自QIAGEN公司，基因合成和载体链接由苏州金唯智生物科技有限公司完成。基因测序由华大基因公司完成。MTS试剂购自Promega公司。ELISA试剂盒购自江苏科特生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 HLA-G5的合成 按文献报道[10]，HLA-G5是由HLA-G外显子1-4，加上之后紧接的一段内含子4，其翻译终止于内含子中的终止密码子。检索GenBank中HLA-G基因CDS中外显子1-4加第四内含子序列得到HLA-G5序列 ......