泮红飞，冯继红，杨涛羽，苏 俊，刘芊伊，刘旭恒，龙润莹，殷 茜，罗军敏

    (1.遵义医学院 免疫学教研室，贵州 遵义 563099; 2.遵义医学院 贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治特色重点实验室，贵州 遵义 563099; 3.遵义医学院附属医院 肿瘤医院腹部肿瘤科，贵州 遵义 563099；4.遵义医学院附属医院 病理科，贵州 遵义 563099)

    甲状腺癌(Thyroid Cancer,TC)是最常见的内分泌恶性肿瘤之一，近年已成为发病率增速最快的恶性肿瘤[1]。甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Cancer,PTC)是甲状腺癌最常见的一种，约占80%。手术、化疗及I131放疗等治疗手段虽已取得较明显的临床疗效，但复发和转移仍是导致PTC患者死亡的主要原因[2-3]。因此，进一步揭示PTC细胞恶性生物学行为变化的规律及相关的驱动机制，对有效控制PTC患者的复发和转移，以及延长总生存期具有重要临床价值。狐猴酪氨酸激酶3(The lemur tyrosine kinase 3,LMTK3)是丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶家族(Serine-threonine-tyrosine kinase family)的重要成员。多项研究已表明，LMTK3在多种恶性肿瘤组织及血清中高表达，干预其基因表达可导致肿瘤细胞相关恶性生物学行为的改变。迄今为止，有关LMTK3与PTC相关性的研究仅限于组织和血清层面，尚未见针对PTC细胞的报道。本研究以PTC细胞模型BCPAP为研究对象，应用基因沉默LMTK3的慢病毒载体感染BCPAP细胞后探讨其增殖、迁移、侵袭及凋亡等恶性生物学行为的改变情况，从而在细胞水平初步阐明LMTK3的生物学功能，为甲状腺乳头状癌靶向治疗的靶点选择提供新依据。

    1 材料与方法

    1.1主要试剂和仪器人甲状腺乳头状癌细胞株BCPAP购自中科院上海细胞库；胎牛血清和1640培养基购自Gibco公司；含shLMTK3的重组慢病毒载体由OBiO公司包被完成；LMTK3兔抗人多克隆抗体购自Lifespan公司；过氧化物酶标记的山羊抗兔多克隆抗体、过氧化物酶标记的驴抗小鼠多克隆抗体购自Proteintech公司；β-actin小鼠抗人单克隆抗体来自Cell Signaling Technology公司；全蛋白提取试剂盒购自凯基生物科技有限公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒和ECL发光液均购自碧云天公司；Matrigel胶和流式凋亡检测试剂盒购自BD公司；CCK8试剂购自日本同仁公司；Transwell小室购自美国Corning公司；TE2000-S型倒置荧光显微镜购自日本Nikon株式会社；无菌操作台和细胞培养箱购自美国Thermo Fisher Scientific公司；流式细胞计数仪FACS Calibur购自美国Becton- Dickinson公司 ......