游 兴，魏在荣，陈 伟，邓呈亮，张文夺，王达利，龚飞宇

    (遵义医学院附属医院 烧伤整形外科，贵州 遵义 563099)

    随着机械化进程的推进，皮肤软组织缺损病例在临床上有增无减。纵使医疗技术的飞速发展，已使得创面的简单修复基本得到解决。但伤后感觉功能的重建往往比较棘手，尤其是常与外界接触的四肢创面，感觉的重获显得尤为重要，目前临床上已较成熟地应用了带感觉神经的皮瓣进行修复[1]，且效果满意。但对于部分患者，因自身解剖变异或局部毁损过重，缺少甚至没有可切取带神经皮瓣的理想供区，这部分患者感觉功能的重建给临床医师提出了新的要求，局部神经再生成为了新的研究方向。以往在感觉功能重建方式上主要是针对痛、温觉的恢复，然而感觉的完美重建应该是多方面的，包括触、压、痛、温等感觉。四肢是触觉敏感部位，触觉的减退或消失明显影响患者生活质量。Merkel细胞是一种皮肤上皮细胞[2]，数量很少，位于表皮、真皮交界处，和Aβ感觉神经元形成一种特殊的类似突触样的联系[3-4]。Merkel细胞存在于多数脊椎动物皮肤中的神经末梢，已有研究[5]证实，该细胞在皮肤感受轻柔触觉刺激活动中与神经末梢形成特殊结构而共同作用。本实验基于体外Merkel细胞的成功培养，结合MEBO外用为创面愈合提供的有利微环境，联合使用观察其对足底缩足反射及创面新生皮肤神经再生的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 SD鼠100只(建模90只，繁殖幼鼠10只)，[SPF级，许可证号：SCXK(渝)2012-0005，由陆军军医大学医学实验动物中心提供]。MEBO(美宝湿润烧伤膏，汕头市美宝制药有限公司，国药准字Z20000004)。

    1.2 主要实验仪器 超净台(TDGC2J0.5，中国，上海先锋)；离心机(Centrifuge 5417R，德国，Eppendorf)；二氧化碳细胞培养箱(3141I/R，Thermo 美国，Scientific)；显微镜及拍照系统(IX-71-S8F，日本，Olympus)；超纯水系统(Milli-Q Biocel， Millipore，法国)；石蜡切片机(CM3050S，Leica，德国)；细胞培养板(6孔/12孔，Eppendorf，德国)；细胞过滤器(中国，上海生工)；以及相机、手术器械、移液器、离心管、细胞培养瓶、显微器械、无菌手套、注射器、培养皿等等。

    1.3 主要实验试剂 兔抗鼠一抗CK20、山羊抗兔HRP标记的二抗、小鼠抗NF-01抗体、兔抗鼠荧光二抗(abcam，美国)；重组β鼠神经生长因子(PROSPEC)；抗体稀释液、胰蛋白酶、中性蛋白酶、青霉素-链霉素溶液(碧云天 ......