王亚非，邢姝琴，尉志强，黄江海，刘 洁，胡 岳，李运海

    (北京中医药大学东方医院 骨科，北京 100078)

    骨肉瘤是较常见的发生在青少年或儿童的一种恶性骨肿瘤，在小儿骨恶性肿瘤中最多见，约为小儿肿瘤的5%[1]。随着医疗技术的迅猛发展，经手术联合化疗后，骨肉瘤患者的5年生存率已提高到约50%～70%，但化疗药物的耐药性及存在的严重毒副作用使得治疗效果难以令人满意[2]。近年来，在祖国传统中医药中寻找疗效显著且毒副作用小的抗肿瘤药物是研究热点之一。巴戟天是我国“四大南药”之一，具有补肾阳、强筋骨等功效，研究表明，巴戟天含药血清能促进成骨细胞生成，抑制破骨细胞分化，升高成/破骨细胞比例，降低骨代谢，保护骨组织[3]。巴戟天作为治疗骨肉瘤中药复方中的常见药物，其单味药或有效成分对骨肉瘤细胞增殖抑制的相关报道却甚少。JNK信号通路是MAPK家族中三条经典的凋亡通路之一，在细胞凋亡尤其是肿瘤细胞的凋亡过程中扮演了关键角色[4]。本研究以人骨肉瘤MG63细胞为研究对象，采用MTT、流式细胞术、Hoechst荧光染色、Western-blotting等实验技术研究巴戟天含药血清对MG63细胞的增殖和凋亡的影响，并从JNK通路探讨潜在的作用机制，为阐明巴戟天抗肿瘤活性及其临床应用提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 SPF级4周龄SD大鼠12只，雌雄各半，体质量200～220 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证为SCXK(京)2016-0006；人骨肉瘤MG63细胞株(北纳创联)；DMEM培养基(美国Gibco)；兔抗鼠JNK、p-JNK、Bad、p-Bad、Cleaved caspase-3多克隆抗体(英国Abcam)；IgG-HRP标记的山羊抗兔多克隆抗体(武汉博士德)；MTT粉末、Hoechst 33258染液(上海碧云天)；Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(南京凯基生物)；巴戟天颗粒(北京康仁堂药业有限公司)；CO2培养箱、酶标仪(美国Thermo)；倒置荧光显微镜(日本OLYMPUS)；流式细胞仪(美国BD)；凝胶成像分析仪(美国Bio-Rad) ......