杨晓红，杨 琨，廖 立，金 岩

    (1.遵义医学院附属口腔医院 口腔修复科，贵州 遵义 563099；2.遵义医学院附属口腔医院 牙周科，贵州 遵义 563099；3.第四军医大学口腔医院 组织工程研究中心，陕西 西安 710032)

    微小 RNA(microRNA，miRNA)是一类高度保守的、广泛存在于细胞中的单链、非编码小 RNA，一般含有 22～24个核苷酸[1]。通过在转录后水平与靶基因 mRNA 的 3' 非翻译区(untranslated region,UTR)互补结合抑制基因表达[2]，是基因表达的重要调控手段，参与多种疾病的发生发展[3]。最新研究表明，miRNA广泛参与了干细胞的增殖、凋亡、分化、代谢等过程的调控，在其中发挥关键作用[4]。 近年来研究发现miR-27a、miR-130、miR-378和miR-138在干细胞成脂分化过程中起着关键的作用[5]。我们在前期实验中发现绝经后骨质疏松小鼠的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell，BMMSC)中的miR-3077-5P异常升高[6]，证实了miR-3077-5P参与了BMMSC成脂分化能力的调控。近年来有学者报道，通过体内调控干细胞miRNA的表达，可以有效的提高病理状态下组织损伤的修复能力，直接治疗疾病[7]，这些开拓性研究提示miRNA可以作为治疗疾病新靶点思路，假设miR-3077-5P对脂肪前体细胞成脂分化调控具有相似的调控功能，这为miR-3077-5P作为新靶点药物治疗的研发和治疗脂肪分化异常引起的疾病(如骨质疏松、肥胖)提供理论依据。本实验拟通过过表达和下调表达3T3-L1前脂肪细胞中miR-3077-5P，检测过表达和下调表达miR-3077-5P对3T3-L1前脂肪细胞在成脂分化诱导过程中成脂能力的差异，从而探讨miR-3077-5P对3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化过程的调控作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 α-MEM培养基购自美国Gibco公司；优级胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司；细胞总RNA提取试剂盒、一步法RT-PCR试剂盒购自日本TaKaRa公司；油红O购自上海化学试剂采购供应站；IP细胞裂解液、BCA蛋白定量试剂盒购自美国Beyotime公司；miR-3077-5P control、miR-3077-5P mimics、miR-3077-5P inhibitor和内参U6购自广州市锐博生物科技有限公司；siPORTTMNeoFXTM转染试剂购自美国Ambion公司；3T3-L1前脂肪细胞购自上海中科院细胞库；β-actin鼠单克隆抗体、抗小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ ......