刘百庆，张 斌，许 威，张文成，夏时海

    (中国人民武装警察部队特色医学中心 肝胆胰脾中心，天津 300162)

    胰腺癌是一种难治性疾病，与其早期转移且诊断困难而延误治疗时机有很大关系，因而研发针对胰腺癌侵袭转移的药物具有重要的临床价值。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肿瘤细胞发生转移的重要机制，它是指上皮细胞失去极性、细胞间接触转变成间质样细胞的过程，伴随细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的大量产生，从而促进细胞的侵袭转移[1-2]。在胰腺癌患者中，绝大部分为胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)。大量研究证实，EMT在PDAC的侵袭转移中发挥了重要作用。Panc-1细胞是一种常见的用于研究PDAC生物学特性的低分化胰腺癌细胞株，并且，常见的EMT诱导因子转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF β1)可通过激活hedgehog等信号通路诱导panc-1细胞构建EMT模型[3-5]。已有大量的药物研究用于对抗胰腺癌的EMT从而抑制癌细胞侵袭转移[3,5]。氧化苦参碱(oxymatrine,OM)为中药苦参干燥根中提取的生物碱，具有广泛的抗肿瘤作用，可抑制胰腺癌细胞的侵袭转移[6-8]。此外，研究也发现，OM可以抑制结肠癌细胞的侵袭转移，其机制与OM可抑制EMT有关[9-10]。然而，OM对胰腺癌panc-1细胞EMT是否有抑制作用及其机制仍不清楚。基于上述研究，我们在TGF β1诱导panc-1细胞构建EMT模型的基础上，利用OM进行干预，检测EMT相关因子的表达变化；同时检测hedgehog信号通路中核心转录因子Gli2的表达变化，初步探讨OM对胰腺癌侵袭转移的作用及其可能机制，为研发抗癌药物提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人胰腺导管癌细胞株panc-1购自中科院上海生科院细胞资源中心；高糖DMEM培养基购自美国Gibco公司；胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)购自美国Gibco公司；青链霉素混合液购自北京索莱宝公司；OM购自英国Abcam公司；TGF β1购自美国Sigma公司；Transwell小室购自美国Millipore公司；Matrigel基质胶购自美国BD公司；蛋白Marker购自北京索莱宝公司；RIPA蛋白裂解液购自上海碧云天公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒购自北京鼎国昌盛公司；PVDF膜购自美国BD公司；单克隆兔抗人E-cadherin、兔抗人Vimentin、兔抗人Snail1、兔抗人Twist1和兔抗人GAPDH 购自沈阳万类公司；兔抗人Gli2购自武汉三鹰公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔IgG二抗购自北京鼎国昌盛公司；ECL发光液购自上海碧云天公司；垂直板电泳槽、电泳仪、转膜槽购自美国Bio-Rad公司；5200Multi自动荧光/化学发光成像仪购自上海天能科技有限公司；ECLIPSE Ti-U荧光倒置显微镜购自日本Nikon公司 ......