肖志中，韩 光，周 娟，陈旭义，王振国，张景童，刘 洋

    (1.中国人民武装警察部队特色医学中心 泌尿外科，天津 300162；2.中国人民武装警察部队特色医学中心 脑科中心，天津 300162；3.中国人民武装警察部队特色医学中心 医教部，天津 300162；4.中国人民武装警察部队后勤学院 二大队，天津 300309；5.上海市第四人民医院 神经内科，上海 200000)

    肾细胞癌(renal cell carcinoma，RCC)占成人恶性疾病的2%～3%，是男性常见肿瘤的第7位，女性常见肿瘤的第10位[1]，且RCC的发病率会随人口年龄的增长而进一步上升[2]。目前，世界卫生组织将RCC分为透明细胞癌、乳头状细胞癌以及嫌色细胞癌。其中，75%～90%为透明状细胞癌，10%～15%为乳头状细胞癌，4%～5%为嫌色细胞癌[3]。定位于染色体10q23上的PTEN基因可以抑制多部位癌细胞的增殖[4]。PTEN可以介导蛋白的磷酸化作用，3,4,5-三磷酸脂酸肌醇(phosphatidylinositol-3 kinase，PIP3)是PTEN的最常见的底物。PIP3是细胞内信号通路的第二信使，D3位点上被PTEN磷酸化后可以直接抑制PI3K的活性，参与PI3K/AKT信号通路的负性调节[5]。PIP3/PI3K-AKT信号通路主要调节细胞的新陈代谢、细胞增殖和细胞迁移，并且在肿瘤的发生发展过程中有着至关重要的作用。肿瘤的发生，通常会引起PTEN的功能紊乱、变异或者沉默，造成PI3K/AKT信号通路的活化。先前的研究中发现，肿瘤产生的药物耐受性，也很可能是因为PTEN的功能紊乱而导致的[6]，PTEN的功能紊乱同时也会显著提高肿瘤入侵和迁移能力。本实验就卡博替尼对肾透明细胞癌的治疗作用进行了探索，为卡博替尼的临床应用提供了一定的实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 试剂 RPMI-1640(80002)、胎牛血清(FBS)(10100147)、高糖DMEM培养基(H-DMEM)(11995065)、GultaMax(25030081)购自Gibco公司；盘尼西林-链霉素混合试剂(P1400)、MTT试剂盒(M1020)购自索莱宝生物科技公司；EcoRI(R0101L)、XhoI(R0146L)购自NEB公司；Hieff Trans脂质体核酸转染试剂(40802ES01)、G418购自翊圣生物公司；Cabozantinib(S1119)、SF1670(S7310)购自Selleck公司；动物组织/细胞RNA提取试剂盒(CW0584)、HiFi-Script cDNA第一链合成试剂盒(CW2569)、Super TaqMan一步法荧光定量PCR试剂盒(CW2695)购自康为世纪公司；SUCLG2(ab187996)、ACO2(ab110321)、p53(ab26)、Bcl-2(ab692)、BAX (ab182733)、增殖细胞核抗原(PCNA)(ab29)、AKT(ab8805)、p-AKT(ab38449)、mTOR(ab2732)、p-mTOR(ab109268)抗体购自Acam公司；786-O细胞(TCHu186)购自中科院上海典藏细胞库 ......