余春波，李大玉，范 芳，刘喜平，陆红玲，刘 云，李长福

    (1.遵义医科大学 生物化学与分子生物学教研室，贵州 遵义 563099；2.遵义医科大学 医学与生物学研究中心，贵州 遵义 563099)

    肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一。肝癌的治疗有手术、化疗等，而多药耐药(multidrug resistance,MDR)的产生是肝癌化疗失败的主要原因。DNA依赖蛋白激酶催化亚基(the DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)是DNA依赖蛋白激酶的催化亚单元，属于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)家族，可通过自身磷酸化或磷酸化下游分子参与细胞内的各种生物学活动，包括参与DNA修复、细胞凋亡途径的信号传导等[1-3]。课题组前期研究发现，shDNA-PKcs干扰质粒能抑制BEL7402/5-Fu细胞中DNA-PKcs的表达[4]，抑制DNA-PKcs表达能增强肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu对化疗药物的敏感性[5],沉默DNA-PKcs的表达能促进肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu的细胞凋亡[6]，但其机制尚不清楚。本研究拟观察DNA-PKcs沉默后对肝癌耐药细胞BEL7402/5-Fu凋亡及其机制的影响，探讨DNA-PKcs在肝癌耐药中的作用及机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 BEL7402/5-Fu细胞株购于南京凯基生物科技发展有限公司；siRNA寡核苷酸购于上海吉玛基因生物技术有限公司；RNAiMAX、DAPI、Alexa Fluor594、Alexa Fluor 488购买于Invitrogen公司；Hoechst 33342染色液购自北京索莱宝科技有限公司；DNA-PKcs、细胞色素C、粒体抗体购于英国Abcam公司；AIF、Bax、caspase-3和β-actin抗体购买于Proteintech公司 ......