高露瑶，蔡国徽，敖弟书，宋 鸿

    (遵义医科大学 微生物学教研室，贵州 遵义 563099)

    近年来用于细胞三维培养的支架材料得到了迅速发展，一些生物聚合材料(PLLA、PLGA、PLLA-PLGA共聚物)及生物材料(胶原、藻酸盐、琼脂糖等)在细胞培养中得到了广泛应用[1-2]。然而，理想的细胞支架材料必须有明确的组份及其适合细胞生长的孔隙率，就此而言，离子型纳米自组装短肽的成份纯净、性能稳定、无免疫原性且降解产物无毒，并具有较好的生物相容性及能自组装形成纳米级纤维网络结构等特点，被视为理想的细胞培养基质材料[3-5]。

    目前，卵巢癌的病死率高居妇科恶性肿瘤的首位，然而对卵巢癌的发病机理至今尚不明确[6]，限制了临床对卵巢癌的诊治，因此建立能模拟体内卵巢癌细胞生长特点的培养模型，将促进对卵巢癌发病机理的了解，同时也有利于临床药物的研发和筛选。本文拟构建卵巢癌细胞A2780纳米自组装短肽水凝胶三维培养模型，为探索理想的卵巢癌体外实验模型提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料与仪器 人卵巢癌细胞系A2780购自南京赛博生物科技有限公司；RADA16-I([COCH3]-RADARADARADARADA-[CONH2])由上海波泰生物科技有限公司合成；Matrigel、I型胶原(Collagen I)购自美国BD公司；RPMI-1640培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司；DNA荧光定量检测试剂盒、钙黄绿素AM、鬼笔环肽、DAPI均购自美国Sigma公司；活性氧检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所；其余抗体均购自英国Abcam公司。

    CO2培养箱(3131型，美国Thermo公司)；荧光分光光度计(3001-1913型，美国Thermo公司)；荧光倒置荧光显微镜(IX71型，日本Olympus公司)；透射电镜(H-7650型，日本Hitachi公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 透射电镜的观察 用0.01 mol/L PBS(pH=7.4)分别配制0.1 mg/mL RADA16-I、0.5 mg/mL Matrigel及0.06 mg/mL Collagen I，滴于透射电镜专用铜格上，用1%磷钨酸进行负染，室温晾干后透射电镜观察。

    1.2.2 细胞粘附试验 参照文献[7]包被和水化基底膜，调整细胞密度为1×105/mL ......