孙达权，周莉莉，石 松，薛殿婷，徐莹莹

    (贵州医科大学 基础医学院，贵州 贵阳 550025)

    细胞角蛋白(cytokeratin，CK)又叫角蛋白，主要存在于上皮细胞中，是参与固定细胞核和维持细胞形态的重要成分[1-2]。上皮细胞中的角蛋白有20种以上的CKs亚型，其表达主要依赖于上皮细胞的分化程度和类型[3]。在肝脏中，细胞角蛋白8(CK8)和细胞角蛋白18(CK18)最为常见，它们均由中央α-螺旋杆状结构域与非α-螺旋N-末端头部和C-末端尾部结构域组成[4-5]。不同细胞角蛋白间可以形成非共价杂聚物，聚集成长丝并产生维持细胞完整性的细胞质丝网络[6]。在非癌性组织胚胎发育过程中，CK18不是广泛性表达的，而是随着上皮细胞发育的阶段不同而特异性表达的，如CK18在正常腺上皮细胞、移行上皮细胞和肝细胞中表达，但不在鳞状上皮分化而来的上皮细胞中表达[7-10]。

    在肿瘤诊断中，CK18作为肿瘤标志物广泛用于细胞癌性诊断[11]。研究表明，CK18在不同类型的肿瘤中扮演的角色各有差异。在乳腺癌或结直肠癌中，CK18与肿瘤预后较差相关[12-13]。在口腔癌和尿道移行细胞癌中，CK18表达上调与不良预后相关[14]。这些研究结果暗示在不同类型的肿瘤中，CK18功能可能各不相同，要确定CK18在某一种肿瘤中的具体作用需要对其进行具体研究和分析。

    本研究通过构建CK18单克隆稳转Hep G2肝癌细胞株，观察CK18对Hep G2肝癌细胞增殖和迁移的影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料 Hep G2细胞购自中科院上海细胞库(中国)。新生牛血清购自杭州四季青(中国)。RPMI-1640细胞培养基、Trizol、Lipofectamine 2000购自Invitrogen(美国)。pEBFP-C1保存于本实验室。无内毒素质粒中量制备试剂盒、感受态DH5均购自北京天根生物(中国)。高保真反转录试剂盒、DNA 琼脂糖凝胶回收试剂盒及限制性核酸内切酶XhoI和EcoR I、T4 DNA ligase 购自大连宝生物(中国) ......