周小仙，朱 珠，陈泽慧，陈安林，杨智芳

    (1.遵义医科大学附属医院 检验科，贵州 遵义 563003；2.遵义医科大学 检验医学院，贵州 遵义 563006)

    布鲁菌是一种兼性细胞内寄生菌，人体感染后可引起复发性发热和流感样症状，并导致多器官受累，家畜感染后可引起流产和不孕。布鲁菌作为胞内寄生的隐匿性病原体，对宿主免疫机制具有调节作用。布鲁菌感染后，宿主中性粒细胞几乎不能被激活，导致其能通过抵抗吞噬细胞杀伤机制而逃避天然免疫系统和特异性免疫系统的清除作用[1-3]。大部分抗菌药物不能渗透巨噬细胞膜而发挥抗菌作用，以上这些因素均可能导致布鲁菌感染治疗失败率高、复发率高、周期长、副作用大[3]，甚至已有强力霉素耐药和利福平耐药的布鲁菌出现[4]。因此，寻找一种安全有效、毒副作用小且能够透过细胞膜而用于治疗布鲁菌病的药物具有十分重要的意义。大黄素是一种蒽醌类化合物，具有水溶性差、脂溶性好的特点[5]，对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等病原菌具有一定的抑菌作用[6]。本课题组前期研究发现，大黄素可通过增加IL-6、TNF-α 和IFN-γ 的表达量，增强巨噬细胞对布鲁菌的杀伤能力[7]。为了进一步证实其疗效，本课题组通过构建布鲁菌感染BALB/c小鼠模型以观察大黄素对布鲁菌感染小鼠的治疗效果，以期为大黄素抗布鲁菌感染提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 BALB/c 小鼠，雌雄各半，SPF级6～8周，购自第三军医大学实验动物中心，体重18～20 g。

    1.2 试剂 大黄素(纯度 ≥ 99.0%)购自美国Sigma公司；胰蛋白胨大豆琼脂、胰蛋白胨大豆肉汤平板购自青岛高科园海博生物科技有限公司；基因组DNA 提取试剂盒及PCR 扩增试剂盒购自上海生工生物公司；Mueller-Hinton Broth 肉汤购自英国OXOID 公司；试管凝集试验试剂盒购自北京赛诺利康生物技术有限公司。

    1.3 仪器设备 VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统及比浊仪为法国梅里埃公司产品；T100TMThermal Cycler PCR 扩增仪为德国BIO RAD 公司产品；DYCP-31DN 型电泳仪为北京六一仪器厂产品；FA1104B 电子天平为美国奥豪斯公司产品。

    1.4 方法

    1.4.1 实验菌株分离培养鉴定 采用VITEK 2 Compact 全自动微生物鉴定仪对临床分离菌株进行初步鉴定，16S rDNA 分子技术对该菌株再次进行菌种鉴定，16S rDNA 进行PCR 扩增的引物序列为：27 F:5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'；1492 R: 5'-TACGYTACCTTGTTACGACTT-3' ......