方兴国，李波涛，刘模荣，王 红，刘华庆，文国荣

    (1.遵义医科大学附属医院 消化内科, 贵州 遵义 563099； 2.遵义医科大学附属医院 病理科， 贵州 遵义 563099)

    结肠癌在消化道恶性肿瘤中发病率仅次于胃癌，位居第二，近年来其发病率呈不断上升趋势，尤其是中青年更为明显。通过外科手术、放疗、化疗等综合治疗取得了一些进步，但总体5年生存率仍低于50%。为此，早期诊断和有效治疗成为临床医学面临的挑战。研究证实超过90%以上的结直肠癌是由腺瘤性息肉恶变而来，从正常的结肠粘膜→息肉→腺癌的系列演变过程中有多种肿瘤因子的参与。环氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)、5-脂氧合酶(5-lipoxygenase，5-LOX)表达升高及前列腺素E2(prostaglandinE2，PGE2)、白三烯B4(LTB4)生成的增多均参与多种肿瘤的发生、发展，使用环氧合酶-2、5-脂氧合酶抑制剂，可使环氧合酶-2、5-脂氧合酶及相应的下游代谢产物减少，起到抑制肿瘤的作用[1-3]。但它们共同在结肠腺瘤-腺癌演变中的作用了解甚少。本研究拟检测人的正常结肠粘膜、结肠增生性息肉、结肠腺瘤及腺癌组织中COX-2mRNA、5-LOX mRNA和蛋白质的表达情况，并通过二甲基肼(DMH)建立大鼠结肠腺瘤-腺癌模型，观察COX-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)、5-LOX抑制剂齐留通(Zileuton)对结肠腺瘤、腺癌发生发展的影响，以及相应结肠组织中的COX-2 mRNA、5-LOX mRNA表达和下游产物PGE2和LTB4浓度的变化，以研究COX-2、5-LOX对结肠腺瘤、腺癌发生发展的影响。

    1 材料与方法

    1.1 研究对象 选取2016年10月至2017年10月在遵义医科大学附属医院消化内科行肠镜检查并经病理确诊的结肠标本(直径≥1cm)71例：增生性息肉25例，男12例，女13例，平均为(48±3)岁；腺瘤性息肉31例，男16例，女15例，平均为(46±2)岁；结肠腺癌15例，男7例，女8例，平均为(58±5)岁；正常结肠黏膜组织15例，男8例，女7例，平均为(50±2)岁。所选病例均平时身体健康，主要因出现消化道症状就诊行肠镜检查首次确诊的患者。SD大鼠(清洁级，雄性)55只，购于陆军军医大学实验动物中心(SCXK(渝)2012-0005)，体重180～220g。

    1.2 实验试剂 二甲基肼(Sigma公司)；塞来昔布、齐留通(美仑生物技术有限公司);小鼠抗人β-actin抗体(Santa Cruz公司);驴抗山羊IgG(H+L)(碧云天生物科技研究所)；GTVisionTMⅢ抗鼠兔(基因科技上海有限公司)；山羊抗人5-LOX多克隆抗体和山羊抗人COX-2多克隆抗体(Santa Cruz公司)；山羊IgG-免疫组化试剂盒SABC即用型(博士德生物工程有限公司)；RT-qPCR转录试剂盒及相关引物(宝生物TaKaRa公司)；PGE2、LTB4检测的ELISA试剂盒(碧云天生物科技研究所) ......