王 敏，陆 祥，曾 峰，檀 军，侯泽宇，陈 伟

    (1.遵义医科大学 组织胚胎学教研室，贵州 遵义 563099；2.贵州中医药大学第一附属医院，贵州 贵阳 550001；3.遵义医科大学第一附属医院，贵州 遵义 563099)

    乳腺癌是女性最为常见的恶性肿瘤，全球每年新发乳腺癌约167.1万人，年死亡人数约52.2万计[1]。乳腺癌是五大常见癌症其中之一，也是全球女性最常见的癌症死亡原因[2-4]。乳腺癌的发病机制尚不明确[5]，治疗方法尽管不尽相同，但结果却大同小异，依然呈现出高复发、高转移和高死亡率等特点[6]。所以，建立体外的原代人乳腺癌细胞培养模型，用于人乳腺癌细胞分子生物学特征的研究，其重要性日显突出。研究表明，原代培养人乳腺癌细胞的常见方法包括组织块贴壁法、酶消化法和细胞培养法，与酶消化法和细胞培养法相比较，组织块贴壁法实验成本更低廉，细胞存活率更高[7]。但其在实际应用中也存在自身的缺点，如易污染，在剪碎组织培养细胞过程中，易造成组织损伤及失活，不利于细胞爬出，耗时较长等，尤其是成纤维细胞的生存和适应能力强，较早于肿瘤细胞从组织块中爬出，进一步包绕组织块导致肿瘤细胞难以爬出，少量癌细胞爬出后也很难完全去除成纤维细胞，纯化方法不易操作而导致培养失败[8]。针对这些问题，本研究采用改良的组织块培养方法将乳腺癌组织块中的癌细胞分离、纯化、进行体外培养，期望在体外培养高纯度的原代人乳腺癌细胞，为后续体外实验研究奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 人乳腺癌组织标本来源 收集2017年6月至2019年4月遵义医科大学第一附属医院甲乳外科10例乳腺癌患者的新鲜癌组织标本。在无菌条件下，切取癌组织标本约1cm×1cm×1cm大小，放入无菌装有平衡盐的离心管中，在冰桶中迅速带回实验室。术后经病理诊断均为乳腺导管原位癌，患者年龄在28～56岁，术前均未进行放化疗，本研究征得患者或家属知情同意，符合伦理学规范。

    1.1.2 主要试剂与仪器 DMEM培养基(Hyclone，美国)；胎牛血清(Hyclone，美国)；CO2培养箱(Thermo Forma，美国)；CA153兔抗人多克隆抗体(proteintech group，美国)；现配0.25%胰蛋白酶(Hyclone，美国)；Asinvert200倒置显微镜(Nikon，日本)；流式细胞仪(BD ......