汤 蜜，李沁芸，李少斌,2，颜晓勇，余丽梅,2，杨亦彬,2

    (1.遵义医科大学附属医院 肾内科，贵州 遵义 563099；2.遵义医科大学附属医院 细胞工程实验室再生医学科，贵州 遵义 563099)

    近年来大量国内外研究强调了缺氧在慢性肾脏疾病(Chronic kidney disease,CKD)进展中的重要性[1-2]。研究发现低氧状态贯穿了糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)发生发展的全过程，并认为这种状态与肾脏微血管病变以及局部新生血管生成密切相关[3-4]。一般情况下，机体可通过激活HIF/PHD轴上的缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible factor,HIF)，进而激活下游靶基因(血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)等，对缺氧做出适应性应答。但由于HIF半衰期短，易降解[5]，导致机体对缺氧状态下的缓冲储备能力下降，可能是推进DN进展的主要原因之一。脯氨酸羟化酶(Proline hydroxylase ,PHD)作为HIF降解反应的关键酶，在调节HIF/PHD轴的HIF表达上有重要作用[6]。含羞草素是一种PHD广泛抑制剂，可通过抑制PHD促进HIF表达，改善机体肾氧平衡。本实验用含羞草素治疗糖尿病大鼠，观察含羞草素对糖尿病大鼠肾脏缺氧及HIF/PHD轴上的相关因子(HIF-1α、PHD2、HO-1)表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料 200～240g SD大鼠(由重庆第三军医大学野战外科研究所提供)，3～4月龄；共24只；链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)、含羞草素 (Sigma公司)；小鼠抗大鼠HIF-1α单克隆抗体、兔抗大鼠PHD2多克隆抗体(NOVUS 公司)；小鼠抗大鼠HO-1单克隆抗体(Abcam 公司)；小鼠抗大鼠β-actin单克隆抗体(ZSGB-BIO公司)；缺氧探针Hypoxyprobe?-1 Kit(HPI公司)；RNA逆转录试剂盒、RNA引物、扩增试剂盒(Sangon Biotech公司)；安稳血糖仪(Sinocare 公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 造模分组及采样 本实验由对照组、糖尿病组以及含羞草素治疗组组成 ......