胡松华，王乾兴，路 建，郑学玲，李 姣

    (遵义医科大学 细胞生物学教研室，贵州 遵义 563099)

    骨质疏松是一种以骨量低下、骨的微结构损坏，导致骨的脆性增加、骨折易发的骨病[1]。促进新骨形成被认为是从根本上防治该病的有效策略。新骨形成来源于骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)，而MSCs所参与的骨重建需在骨髓微环境内进行，骨髓微环境为其基础[2]。即使骨髓微环境在病理状态下，其对干细胞的增殖分化这两大特性仍产生一定的调节影响[3]。骨质疏松患者的骨髓微环境被改变[4-5]，极有可能影响了 MSCs 的正常生物学特性，导致其难以分化为成骨细胞，新骨形成受到抑制。前期研究中我们建立小鼠骨质疏松病理模型，并在体外分离培养了模型组及对照组骨髓 MSCs。研究发现，模型组 MSCs 增殖能力及多向分化潜能均与对照组有明显差异，表现为增殖能力下降，成骨细胞分化能力下降，但向脂肪分化能力增加[6]。这些研究结果提示长期处于病理微环境下的 MSCs 干性受到影响，难以发挥正常功能以对骨组织进行修复，可能是骨质疏松发病的关键原因。为进一步明确病理骨髓微环境对 MSCs生物学特性的影响，本研究分离了模型组及对照组小鼠骨髓液，并用于处理体外培养的正常 MSCs，通过细胞增殖、凋亡、迁移、多向分化等实验来检测 MSCs生物学特性的改变。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及材料 清洁级雄性 C57BL6/J 小鼠( 8周龄16 只、4周龄8只)，体质量 20～25g，购自上海斯莱克实验动物有限公司[许可证号 SYXK(沪)2018-0062]。DMEM低糖培养基、胰蛋白酶、胎牛血清(FBS)均购自 Hyclone 公司；β-磷酸甘油、抗坏血酸、胰岛素、Dex、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、油红 O、茜素红均购自 Sigma公司；CKK-8 检测试剂盒及 TUNEL 染色试剂盒购自碧云天公司；抗 Osx(ab209484，兔源)、Runx2(ab23981，兔源)、C/EBPα (ab15048，兔源)抗体购自Abcam 公司；抗 PPARγ (2435，兔源) 抗体、HRP 标记抗兔 IgG 二抗(7074)购自 Cell Signal Technology 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 动物模型建立 C57BL/6J小鼠(雄性、8周龄)正常饲养 1 周后随机分为两组，每组 8 只。骨质疏松模型组(OP 组)：按 50 mg/kg 体质量皮下注射 Dex；对照组(NC 组)：注射同等剂量生理盐水 ......