周 俊，袁 丹，刘蒙蒙，钟 栎，刘俊江，孙小杰，周正平

    (1.遵义医科大学 病理学教研室，贵州 遵义 563099; 2.遵义医科大学 电镜室,贵州 遵义 563099)

    子宫内膜癌(Endometrial carcinoma)是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一， 2018年国际癌症研究机构统计全球约有382 069例新发病例和89 929例死亡病例，其高发病率和高死亡率，严重威胁女性健康[1-2]。子宫内膜癌以Ⅰ型(雌激素依赖型)多见，其主要组织学类型是子宫内膜样癌(Endometrioid carcinoma,EC)，雌激素受体(Estrogen receptor,ER)多呈阳性表达，根据分化程度EC可分为高、中、低分化3种[3-4]。在EC发生发展的过程中，长期无孕激素拮抗的高雌激素环境是最主要的高危因素，细胞周期(Cell cycle)异常调控可能也参与了这个过程，p57kip2属于细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(Cyclin-dependent kinase inhibitors,CKI)中的CIP/KIP家族，在细胞周期调节机制中起负性调控作用，使细胞无法从G1期转变到S期，从而抑制细胞增殖[5-6]。本实验采用不同浓度雌二醇(β-Estradiol，E2)分别干扰两种不同分化的人EC细胞，探讨雌激素、细胞周期调控与子宫内膜癌发生发展的关系。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株 人EC高分化的Ishikawa细胞株购于南京凯基公司，人EC 中分化的JEC细胞株由遵义医科大学微生物教研室提供。

    1.2 试剂与仪器 E2购于Sigma公司，p57kip2鼠抗人单克隆抗体购自Abcam公司；β-actin鼠抗人单克隆抗体购自上海生工生物工程有限公司；二抗山羊抗鼠抗体购自美国LI-COR公司；Western blot检测试剂购自上海碧云天公司。酶标仪(美国Thermo scientific公司)；倒置显微镜CKX41(日本OLYMPUS公司)；透射电子显微镜H-7650(日本日立公司)；Odyssey双色红外激光成像系统(美国LI-COR公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 细胞培养及分组 将RPMI 1640培养基、南美胎牛血清和100 U/mL双抗按90%、10%和1%的比例配制成完全培养基，37℃、5% CO2、饱和湿度条件下体外培养人Ishikawa细胞和JEC细胞。加等量含低、中、高浓度E2(10-6、10-8、10-10mol/L)的培养基体外培养两株人EC细胞作为实验组 ......