周 俊，王凤月，李三华，钟 栎，赵 朔，刘俊江，张春英，周正平

    (遵义医科大学1.病理学教研室；2.电镜室；3.医学与生物学研究中心；贵州 遵义 563099)

    子宫内膜癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其主要组织学类型是子宫内膜样癌(Endometrial carcinoma,EC)。2018年国际癌症研究中心(International Agency for Research on Cancer,IARC) 统计，全球约有382 069例新发子宫内膜癌患者，有89 929例患者死亡，其高发病率和高死亡率严重威胁着女性健康。目前研究发现，无孕激素拮抗的高水平雌激素刺激、肥胖、高血压、糖尿病、不孕、绝经期晚等均为子宫内膜癌的高危因素。但导致子宫内膜癌发生发展的确切机制尚不清楚,可能还与基因突变、翻译后修饰等有关[1-3]。

    p57kip2是最迟被发现的细胞周期调控抑制因子，能广泛抑制细胞周期蛋白依赖性激酶 (Cyclin-dependent kinase,CDK)的激酶活性，使细胞无法从G1期转变到S期，起到负性调控细胞周期的作用[4]。目前研究发现，在多种肿瘤组织中，P57kip2蛋白水平的异常表达可能与表观遗传修饰有关[5]。DNA甲基化是基因表观遗传修饰的重要方式，主要发生于基因启动子区CpG岛，在不改变DNA碱基序列的前提下，通过甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)的催化作用，使CpG岛5’端的胞嘧啶变成5’甲基胞嘧啶(5-mc)，从而改变肿瘤细胞的表型，进而影响肿瘤相关基因的表达[6]。5-Aza-CdR是一种DNMT抑制剂，可使DNMT失活，从而使高甲基化状态的肿瘤抑制基因启动子区DNA去甲基化，激活肿瘤抑制基因，使其重新恢复表达，发挥其抑制肿瘤细胞增殖、促进细胞分化的功能[7]。本实验拟选用人EC的中分化JEC细胞，明确细胞中p57kip2基因变异情况；用5-Aza-CdR干扰后，检测JEC细胞中p57kip2基因启动子区甲基化水平及其蛋白表达情况、细胞生长及细胞形态变化，探讨p57kip2对子宫内膜癌增殖、分化的的影响。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株 中分化人EC JEC细胞株由遵义医科大学微生物教研室提供。

    1.2 试剂与仪器 5-Aza-CdR购自MACKLIN公司，MTT 相关试剂购自南京凯基公司，WB相关试剂均购自上海碧云天生物研究所，p57kip2兔抗人单克隆抗体、二抗山羊抗兔抗体购自Abcam公司，RPMI 1640培养基、南美胎牛血清购自美国Gibco公司 ......