杨定英，肖雁冰，涂 皎，蒋成素

    (遵义医科大学附属妇幼保健院，贵州 遵义 563000)

    在我国，卵巢癌发病率居女性生殖系统肿瘤第三位，而死亡率位于女性生殖道恶性肿瘤之首，是严重威胁女性健康的恶性肿瘤[1]。近年来，肿瘤基因靶向沉默策略是肿瘤防治的新方向。RNA干扰(RNA interference，RNAi)是一种由小分子 RNA(Small interference，siRNA)介导的靶向沉默目的基因技术，能特异性、高效性地抑制目的基因表达，进而抑制肿瘤细胞生长。

    Survivin 是凋亡抑制因子(Inhibitorof apoptosis proteins，IAPs)家族的成员之一[2]，其抑制细胞凋亡和调节细胞周期的双重功能与肿瘤的发生相关[3-5]，表达量随着临床分期和组织学分级的升高而增加[6-7]，是判断卵巢癌预后的重要因子[8]，高表达与预后不良、对化疗药物耐药及放射治疗不敏感密切相关[9]。干扰Survivin表达或功能，可达到抑制肿瘤细胞生长、迁移和侵袭能力，增加肿瘤细胞对化疗药物敏感性[10-12]。激活蛋白-1(Activator protein-1,AP-1)是一类基因编码的核转录因子，1987年美国科学家 Lee 等[13]首次发现，是由含碱性亮氨酸拉链(Basic leucine-zipper,bZIP)结构的Jun蛋白家族、Fos蛋白家族等形成的高度保守的同源或异源二聚体[14]，是调节细胞生存和死亡的关键转录因子之一[15]，对基因表达大都起正性调控作用，与细胞的增殖、凋亡有关。研究显示，卵巢癌组织中AP-1及Survivin阳性表达率和阳性信号表达强度均明显高于正常卵巢组织、卵巢良性及交界性肿瘤，说明AP-1及Survivin对卵巢癌的发生、发展可能起着促进作用[16]。但AP-1是否调控卵巢癌细胞的增殖和凋亡，其调控是否与Survivin的表达相关，目前尚未见报道。

    本研究目的在于通过RNAi 技术靶向沉默卵巢癌SKOV3细胞中AP-1基因的表达，观察SKOV3细胞增殖及凋亡情况，并通过实时荧光定量PCR及Western blot检测SKOV3细胞Survivin mRNA及蛋白表达水平，探讨AP-1基因基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的调控，以期为卵巢癌的治疗提供一种新的策略。

    1 材料与方法

    1.1 细胞及主要主要试剂 SKOV3细胞由湖南丰晖生物科技有限公司代购；DMEM培养基及胎牛血清购自美国Gibco公司；转染试剂Polybrene购自美国Sigma-Aldrich公司；质粒小提及质粒大提试剂盒购自中国TIANGEN BIOTECH公司；MTT细胞增殖检测试剂盒购自北京碧云天公司；AnnexinV-APC/7-ADD双染细胞凋亡检测试剂盒购自中国北京百奥莱博公司；SYBR? Green Realtime PCR Master Mix及ECL化学发光试剂盒购自中国GENVIEW；AP-1抗体、Survivin抗体、β-actin、GoatAnti-Mouse IgG/HRP及Goat Anti-rabbit IgG/HRP购自英国Abcam ......