刘尔黎，钟雯怡，刘增一，杨 琨，刘 琪

    (遵义医科大学附属口腔医院，贵州 遵义 563099)

    2型糖尿病与多种疾病有密切关系，牙周炎现已被普遍认为是2型糖尿病的并发症之一，已被学者确认为糖尿病的第六大并发症[1]。牙周炎是牙齿周围组织的慢性炎症，而目前研究许多的关注点都在于牙龈的退缩、牙槽骨的吸收以及牙齿的松动脱落[2]。但是患者可存在牙齿冷热刺激敏感的症状，很大程度上取决于牙根面的牙骨质破坏以及再生修复能力的降低。2型糖尿病作为全身因素可促进牙周炎的发展，通常其严重程度与血糖水平呈正相关关系[3]，并且牙周炎的治疗有利于糖尿病患者血糖值以及糖化血红蛋白的控制，而治疗糖尿病也有利于牙周炎各项指标的恢复[4]，因此，对糖尿病伴牙周炎造成的更为严重的牙周炎症状机理的研究，有利于此类患者疾病病理状态的合理解释、治疗以及预后效果的评估。

    牙周膜干细胞(Periodontal ligament stem cells,PDLSCs)来源于牙根周围的韧带组织牙周膜，因其具有分化成为成纤维细胞、成骨细胞、成牙骨质细胞的能力，在牙周组织再生中可能扮演重要角色[5]，自Seo等[6]成功把牙周膜干细胞从牙周膜中分离出来，对其相关研究目前仍在不断深入，Gay 等[7]体外实验结果表明，PDLSCs具有较强的克隆形成能力。

    目前有学者研究表明，来源于牙周膜的间充质干细胞可以诱导分化为成牙骨质细胞[5,8-9]，成牙骨质细胞是牙骨质形成的重要功能细胞，在牙根形成、牙骨质修复中起着关键性作用。我们的研究团队前期研究结果显示，2型糖尿病伴牙周炎的牙周膜干细胞骨向分化能力降低[10]，但PDLSCs的成牙骨质分化能力是否发生改变目前还不甚清楚。为此，本研究拟对2型糖尿病伴牙周炎患者牙周膜干细胞的成牙骨质分化能力进行探索，为解释2型糖尿病伴牙周炎状态下，牙周组织再生修复能力降低，牙骨质破坏所导致的牙本质暴露，患者冷热刺激敏感的可能原因提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 仪器及试剂 胎牛血清FBS(四季青公司)；胰蛋白酶、α-MEM培养基、胶原酶、(Gibco 公司)；鼠抗人 CD29、CD44、CD45、stro-1、CD90、CD271、CD166单克隆抗体(Abcam公司)；CCK-8(日本Dojindo Kagaku 公司)；BD流式细胞仪、湿度CO2细胞培养箱、超净工作台、体式显微镜、倒置相差显微镜、荧光显微镜、细胞总RNA提取试剂盒(生工生物公司)；cNCPs英国伯明翰大学的Smith教授提供，Real Time-PCR仪、凝胶成像分析仪、分光光度计、PCR逆转录仪、Western blot相关试剂、ALP定量试剂盒(南京建成) ......