王明阳，唐 颖，刘 芳，陈彩霞，石宝生，袁晓艳

    (1 遵义医科大学 药学院分析化学教研室，贵州 遵义 563099)

    中药钩藤为茜草科植物钩藤[Uncariarhynchophylla(Miq.)Miq.exHavil.]、大叶钩藤(UncariamacrophyllaWall.)、毛钩藤(UncariahirsutaHavil.)、华钩藤[Uncariasinensis(Oliv.)Havil.]及无柄果钩藤(UncariasessilifructusRoxb.)的干燥带钩茎枝[1]。钩藤又名猫爪藤，以带钩的茎枝入药，对头痛眩晕、脑血管疾病和神经疾病有着很好的治疗效果[2]。在中国和日本，被用于清热、灭风寒、抗癫痫、安抚肝脏，并已有数千年的历史[3]。已报道的钩藤化学成分有100多种，包括生物碱类、黄酮类、三萜类和苷类等[4]。吲哚类生物碱是钩藤的主要有效成分，其中以钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱为主要药效成分[5]。然而，研究表明钩藤药材中钩藤碱含量较低[6]，故有效提取钩藤中总生物碱，从而提高中药钩藤的开发利用率，是目前需要解决的问题。本实验采用均匀设计法，以期获取最优的中药钩藤总生物碱的提取工艺条件。均匀设计是通过改进实验程序来优化提取工艺的最有效的实验设计[7-8]。该方法是近年来兴起的工艺优化方法，具有实验次数少、均匀分散、方便、迅速、准确的特点，可使实验点具有更好的代表性[9]。它尤其适用于建模和分析多因素实验，来阐明单一效应和互动效应是如何影响基于一系列统计技术的响应[10]。目前，均匀设计已广泛应用于食品化学、药学、材料科学等领域[11]。

    本研究拟采用超声提取法对钩藤药材进行总生物碱提取，选用U6(64)均匀设计实验法，以钩藤总碱得率为指标，选取乙醇体积分数、提取时间、料液比、提取温度为考察因素，优选钩藤总生物碱的提取工艺。同时建立HPLC对钩藤药材提取物中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱进行定性定量分析，为提高钩藤药材利用率及质量控制标准提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 仪器与试剂 KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；Agilent 1100高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)；FA2004N型电子天平(上海菁海仪器有限公司)；RE-2000B型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；SHB-ⅢG型循环水式多用真空泵(郑州长城科技工贸有限公司)；79CS型双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。对照品钩藤碱(批号 PRF8081601)、异钩藤碱(批号 PRF8102541)、去氢钩藤碱(批号 PRF18032803)、异去氢钩藤碱(批号 PR17062109)均购自成都普菲德生物技术有限公司；乙腈为色谱纯 ......