李 曦，高健美，龚其万，龚其海

    (1.遵义医科大学 基础药理教育部重点实验室暨特色民族药教育部国际合作联合实验室，贵州 遵义 563099； 2.遵义医科大学 药学院，贵州 遵义 563099； 3.遵义甜丁茶业有限责任公司，贵州 遵义 563000)

    目前，肝病患者发病率呈逐年上升趋势，肝炎、肝硬化、急性肝衰竭、肝癌等肝病严重损害人类健康，给患者和社会带来沉重的精神和经济负担[1]。肝脏作为人体内最大的消化器官，具有较强的组织修复和再生能力，当受到急性损伤或其他疾病影响时，会引起肝脏的修复和再生从而迅速的恢复其功能。但是在严重的肝损伤情况下，肝细胞的增殖难以满足肝脏修复的需要，出现肝再生异常[2]。肝脏部分切除术和肝移植是目前国内外治疗多种严重肝脏疾病的有效手段，但手术后易出现肝衰竭等不良反应[3-5]。临床上，促进肝再生的方法主要包括胰蛋白酶抑制剂、肝再生增强剂、皮下肝组织工程等[6-7]，但以上方法可能会导致严重不良反应，例如肿瘤的发生等[8]。因此，探索促进肝再生的方法和策略具有重要意义及广阔的临床应用前景。

    木姜叶柯是贵州省民族中药材，味甘、性平，药食兼用，主要分布于我国长江以南各省区，具有清热解毒、护肝补肾、化痰祛风等功效。三叶苷(trilobatin,TLB)是木姜叶柯主要的黄酮类成分之一，具有抗病毒[9]、降糖[10]、神经保护[11]、抗氧化[12]等药理作用。本课题组前期研究表明，木姜叶柯叶水提物和TLB可以促进PC12细胞的增殖[13]，同时，木姜叶柯水提物能通过调控细胞周期相关蛋白和肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)/酪氨酸激酶(Tyrosine kinase,c-Met)信号通路促进人正常肝细胞L-02的增殖[14]。但是，TLB能否促进肝细胞的增殖尚未见报道。基于以上研究背景，本研究旨在探索TLB对人正常肝细胞L-02的增殖作用，并为探索肝脏疾病以及肝再生的治疗提供新策略。

    1 材料与方法

    1.1 材料及试剂 人正常肝细胞L-02购自中国科学院细胞库；TLB标准品购自广州科迪生物科技有限公司；RPMI Medium 1640培养基、澳洲胎牛血清、胰蛋白酶及青链霉素混合液购自Gibco公司；噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)购自Sigma公司；5-溴脱氧尿嘧啶核苷酶 (5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)ELISA试剂盒购自广州科迪生物科技有限公司；5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EDU)试剂盒购自广州市锐博生物科技有限公司；GAPDH、β-actin小鼠单克隆抗体购自武汉三鹰生物技术有限公司；周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent kinases 4,CDK4)、肝细胞核因子4α(Hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)、cyclin D1、HGF、c-Met、p-c-Met、蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)、p-Akt、细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinase 1/2,Erk1/2)和p-Erk1/2一抗均购自英国abcam公司 ......