周 俊，张春英，李三华，钟 栎，周正平

    (1.遵义医科大学 病理学教研室，贵州 遵义 563099；2.遵义医科大学 电镜室，贵州 遵义 563099；3.遵义医科大学 医学与生物学研究中心，贵州 遵义 563099；4.怀化市第一人民医院 病理科，湖南 怀化 418000)

    子宫内膜癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，子宫内膜样癌(Endometrial carcinoma,EC)是其主要组织学类型。2020年美国子宫内膜癌约有65 620例新发病例，12 590死亡病例，其发病率每年上升1.3%，到2030年总病例数预计会达到1023 290例，在美国女性好发肿瘤中，子宫内膜癌为仅次于乳腺癌的第二大高患病率肿瘤[1-2]。研究证明，子宫内膜癌的高危因素主要是长期无孕激素拮抗的高水平雌激素环境刺激，但其发生发展的确切机制目前尚不清楚，可能与细胞周期异常调控、表观遗传修饰有关[3-4]。

    p57kip2在细胞周期调控过程中，通过阻滞细胞从G1期到S期转变，从而抑制细胞增殖[5]。p57kip2在大多数肿瘤组织中，未见基因突变事件，其异常表达主要与表观遗传修饰有关，如DNA甲基化和组蛋白乙酰化[6]。DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰，在调节基因表达中起着重要作用，主要发生在基因启动子区CpG岛，在甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)的催化下，甲基与5’端的胞嘧啶(C)残基结合，形成5-甲基胞嘧啶(5mC)[7]。

    在DNA复制循环过程中，通过抑制DNMT活性、酶促5-mc降解等方式脱去甲基，可逐渐下调基因组甲基化水平[8-9]。在肿瘤中，DNMT抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)通过取代C与DNMT半胱氨酸残基上的氢硫基(-SH)共价结合，使DNMT失活从而下调肿瘤抑制基因甲基化水平。本实验使用不同浓度5-Aza-CdR干扰人EC中分化JEC细胞不同时间段后，检测不同甲基化水平的p57kip2对细胞生长的影响，为指导临床进一步开展子宫内膜样癌的靶向药物治疗提供一定的实验数据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器 JEC细胞株(中分化)由遵义医科大学微生物教研室提供[10]。5-Aza-CdR购自MACKLIN公司；MTT相关试剂购自南京凯基公司；WB相关试剂均购自上海碧云天生物研究所；p57kip2兔抗人单克隆抗体、二抗(山羊抗兔)购自Abcam公司；RPMI 1640培养液、南美胎牛血清购自美国Gibco公司 ......