谢辉辉，杨登浩，付荣波，赵泽驹

    (遵义医科大学附属医院 泌尿外科， 贵州 遵义 563099)

    输尿管长段或全段缺损的替代治疗主要采用回肠，术后并发症多而呈现多种改良，但始终未能显著降低并发症发生率[1]。裁剪去粘膜回肠输尿管短期实验研究显示效果较好，并发症显著降低，但其管壁损伤、感染和尿液刺激势必诱发炎症反应，术后管壁纤维化可能性较大，远期效果如何尚且不知[2]。Collagen III和Smad2是公认的组织损伤、炎症至纤维化的关键因子，检测其在1年期模型犬回肠输尿管中的表达，结合形态结构变化，可以评估裁剪去粘膜回肠输尿管稳定性和远期效果。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物 实验用比格犬5只，1～2岁龄，12～13 kg/只，购买于陆军医科大学实验动物中心(伦理审查编号：KLLY(A)-2019-033)，饲养于遵义医科大学动物实验中心(SP级)，饲养2周后实施手术。

    1.1.2 主要试剂 RNA Trizol Reagent(批号vs18061730)，购自合肥博美生物科技有限公司生产； TBGreen TM Premix Ex TaqTM Ⅱ(货号RR820A)，RT-PCR：PrimeScript RT reagent Kit(货号RR047A)，购自宝日医生物技术有限公司；抗体 Collagen III抗体，兔克隆抗体(货号：22734-1-ap)，购自Proteintech公司；Smad2抗体，兔克隆抗体(货号：a7699)，购自ABClone公司；β-actin抗体，鼠克隆抗体，(货号：T0022)，购自Affinity公司；生物素化山羊抗鼠抗兔IgG(H+L)，(货号：ab6789、货号：ab6721)，购自英国Abcam--艾博抗(上海)贸易有限公司；目的基因一抗： Collagen Ⅲ，兔多克隆抗体(货号：bs-0549)，购自北京博奥森生物技术有限公司；Smad2，兔多克隆抗体，(货号BA0412)，购自BOSTER公司；生物素二抗：山羊抗兔工作液，(货号SP-9001)，购自北京中杉金桥生物有限公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 模型建立与取样 实验用5只比格犬，雌雄比为2∶3，参照前期实验方法建立动物模型[3]，术前禁食 12 h，采用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后、取仰卧位、备皮，消毒铺巾后、取腹正中线开腹、探查，分离、显露、切除左肾及输尿管 ......