何 江，苏 敏，刘福慧，张 柯，陈 瑶，龙兆钇，袁栋波，董俊杰，何张祎檬，黄俊琼

    (1.遵义医科大学附属医院 输血科，贵州 遵义 563099；2.遂宁市中心医院 输血科，四川 遂宁 629200；3.遵义医科大学临床医学系，贵州 遵义 563099；4.长沙医学院中医学院，湖南 长沙 410219)

    不同亚型流感病毒尤其同一进化组内血凝素(Hemaglutinin,HA)杆部相对保守，针对HA杆部的抗体可与不同亚型流感病毒发生交叉结合。然而，通常情况下针对血凝素的抗体应答以HA头部为优势，流感病毒感染或疫苗接种后血清杆部抗体水平很低，难以用常规方法检测。Luminex是在有色微球、激光技术、应用流体学及高速数字信号处理技术的基础上发展起来的一种多功能液相分析平台，检测灵敏度高，可同时快速测定多达50种流感毒株的抗流感病毒HA抗体浓度。本研究利用昆虫杆状病毒系统表达嵌合血凝素蛋白cH5/3，它由流感病毒H5头部和病毒H3杆部组成，正常人群体内不存在抗H5流感病毒抗体，因此cH5/3只能检测到针对H3杆部的抗体，将纯化的cH5/3蛋白与有色微球偶联后构建Luminex检测体系，用于流感病毒诱导HA杆部抗体的研究。

    1 材料与方法

    1.1 材料 四价流感病毒裂解疫苗购自华兰生物公司；Bio-Plex? Amine Coupling Kit和Bio-Plex Pro Magnetic COOH Beads购自Bio-Rad公司；BSA和蛋白偶联试剂盒购自Sigma公司；His-Tag (D3I1O) XP? Rabbit mAb(CST)、Goat anti-rabbit IgG-PE和Goat anti-human IgG-PE购自SouthernBiotech公司；Sf9细胞系购自上海研一公司；灭活H7N9禽流感病毒由中国科学院微生物研究所毕钰海教授惠赠。

    1.2 对象 本研究共招募12名健康志愿者，年龄19～32岁，平均23岁。所有受试者均为健康成人，未接种过流感疫苗，无自身免疫性疾病，未使用激素或免疫抑制剂。该项目获得遵义医科大学医学伦理会批准，并与所有志愿者签署书面知情同意书。

    1.3 方法

    1.3.1 重组杆状病毒BV-cH5/3的构建 参阅Genebank上的A/Perth/16/2009(H3N2，GQ293081.1)和A/VietNam/1203/04(H5N1，HM006759.1)HA基因序列，取H5头部和H3杆部序列合成嵌合HA基因(cH5/3)。去掉信号肽与跨膜区 ......