曹雪丽，徐继洋，罗俊丽，郭宇含，张 红

    (1.遵义医科大学 贵州省麻醉与器官保护重点实验室暨贵州省普通高等学校脑科学特色重点实验室，贵州 遵义 563099; 2.贵州省司法警察医院 麻醉科，贵州 贵阳 550004)

    体外循环(Cardiopulmonary bypass，CPB)肺损伤是心脏手术常见的术后并发症之一，可发展为急性肺损伤(Acute lung injury，ALI)，甚至急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome，ARDS)，其死亡率高达40%[1]。肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar type Ⅱ epithelial cell，AECⅡ)是肺泡上皮细胞的重要组成部分，主要功能是合成和分泌肺泡表面活性剂，降低肺泡表面张力以防止肺泡萎陷，对肺的气体交换及屏障功能起着关键的作用。有研究发现[2]，在大鼠CPB肺损伤模型中，电镜观察到AECⅡ的嗜锇板层小体减少，线粒体水肿。因此，减轻AECⅡ损伤对寻找CPB肺保护措施有重要意义。

    膜联蛋白A 1 (Annexin-A1，ANXA1)作为一种糖皮质激素调节的钙和磷脂结合蛋白，是重要的内源性抗炎因子[3]，Ac2-26是一种Annexin-A1 N端模拟小分子多肽，具有与ANXA1相似的生物学功能[4]。本实验拟用人体CPB血清建立大鼠原代AECⅡ损伤模型，加入Ac2-26共培养后，观察对大鼠AECⅡ的影响，为临床寻找有效的CPB肺保护措施提供新的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 动物 SPF级健康雄性野生型SD大鼠，8～12周龄，体重250～300 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供(许可证号：SCXK(湘)2019-0004)。

    1.2 药品、试剂和仪器 Ac2-26(美国，MedChemExpress公司)；Ⅰ型胶原酶(德国，Sigma-Aldrich公司)；胰蛋白酶、免疫球蛋白抗原、脱氧核糖核酸酶Ⅰ、DAPI染色液(北京索莱宝科技有限公司)；DMEM/F-12 培养基、胎牛血清(美国，Gibco公司)；Gallios流式细胞仪(美国，Beckman Coulter公司)；3111型细胞孵育培养箱(美国，Thermo公司)；超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)；台式高速冷冻离心机、全波长多功能酶标仪(美国，ThermoFisher公司)；倒置荧光显微镜(日本，OLYMPUS公司)；X-500型高压蒸汽灭菌器(日本，TOMY公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 大鼠AECⅡ的原代培养 用戊巴比妥麻醉大鼠并注射肝素防止肺内血栓形成；麻醉起效后处死大鼠 ......