董姝君，高昕乐，罗 婷，陈燕玲，何柳桦，王静蕾，夏雨果，陈应琼

    (1.遵义医科大学珠海校区 病理生理学教研室，广东 珠海 519041；2.遂宁市中心医院 病理科，四川 遂宁 629000)

    对比剂肾病是导致医源性急性肾功能损伤的第三大主因，也是缺血性心脏病患者PCI术后死亡的主要原因[1-2]。对比剂肾病的发病机制复杂，目前认为其发病机制主要与对比剂引起近端肾小管空泡转化、间质水肿和肾小管变性，肾脏微血管结构改变，氧化应激及炎症反应等因素有关[3-4]。其中，肾小管上皮细胞损伤在对比剂肾病的发生发展中占据重要地位。课题组前期研究结果显示，对比剂可直接激活肾小管上皮细胞内炎症小体继而诱导细胞凋亡[5]。而炎症小体的激活以及细胞凋亡均与内质网应激有密切关系[6]。在缺血缺氧以及代谢障碍等刺激因素作用下，内质网功能出现紊乱，使大量错误折叠蛋白质堆积，此时内质网可通过未折叠蛋白反应及内质网相关降解途径(泛素-蛋白酶体)来减少错误折叠蛋白质在内质网腔内蓄积，这个过程称为内质网应激[7]。适度的内质网应激有助于内质网稳态的恢复，但当其反应过度时则会激活炎症小体，甚至引起细胞凋亡。由于内质网应激与炎症小体及细胞凋亡密切相关，而对比剂引起的细胞损伤又与炎症小体的激活以及细胞凋亡密切相关，我们推测内质网应激可能参与了对比剂诱导的肾小管上皮细胞损伤。因此，本研究拟探讨内质网应激抑制剂4-PBA对碘普罗胺诱导的HK-2细胞是否具有保护作用及其可能机制，为对比剂肾病的防治提供新思路。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验对象 HK-2细胞株由中山大学病理生理学教研室王蔚东教授馈赠，购自美国菌种保藏中心(American type culture collection,ATCC)[8]。

    1.1.2 实验材料及试剂 4-PBA为美国MedChem Express公司产品；碘普罗胺为拜耳医药保健有限公司产品；BCA蛋白浓度测定试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific公司；发光底物HRP为美国Milipore公司产品；胰蛋白酶-EDTA(0.25%)、DMEM/F12培养基及胎牛血清购自美国Gibco公司；荧光探针DCFH-DA、DAPI染色液为美国Sigma-Aldrich公司产品；CCK-8试剂盒为日本同仁化学研究所产品；GRP78、eIF2α、p-eIF2α、p-JNK、Bax、Bcl-2及内参GAPDH等Ⅰ抗及相应的Ⅱ抗均为美国Cell Signaling Technology公司产品 ......