尚 羽，李康睿，叶 民，沈华超

    (1.南京医科大学附属明基医院 神经内科，江苏 南京 210000；2.东部战区总医院 神经内科，江苏 南京 210000)

    缺血性脑卒中是一种常见的神经系统疾病，是导致死亡或长期残疾的主要原因之一。这种致残事件是由栓子或血栓引起的脑血流量突然下降引起[1]。目前最有效的治疗策略是立即恢复脑血流量。然而，当血液供应恢复时，再灌注可能会损伤大脑，导致不良的临床结果和一系列病理生理事件，如炎症、细胞凋亡、氧化应激和线粒体功能障碍[2-3]。虽然临床上常用溶栓剂治疗缺血性脑卒中，但其治疗窗狭窄等安全问题限制了其应用[4]。因此，探索防治缺血性脑卒中的新靶点至关重要。细胞疗法是治疗包括脑卒中在内的许多疾病的有前途的策略[5]。其中，间充质干细胞(MSCs)具有可用性、可快速扩增以及在同种异体移植中没有伦理和免疫问题等特点[6]。最近的研究表明，骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植可减少脑卒中后的梗死面积并改善神经功能，但确切的分子机制尚不清楚[7]。Toll样受体4(TLR4)是先天免疫系统的跨膜受体蛋白，属于I型跨膜糖蛋白受体家族。在脑缺血再灌注(I/R)过程中，内源性配体通过TLR4信号通路激活核因子-κB(NF-κB)，诱导产生大量促炎因子、趋化因子、粘附分子等分子，产生炎症级联反应，从而加剧脑组织损伤[8]。研究表明，在脑缺血再灌注条件下，TLR4基因敲除小鼠的梗死体积明显减少，NF-κB的活化和炎症因子表达减少[9]。以上发现提示TLR4介导的炎症反应通路有望成为预防和治疗缺血性脑卒中的重要靶点。为给缺血性脑卒中患者提供神经保护治疗的新视角，本研究主要从TLR4/NF-κB炎症通路入手，探讨BMSCs对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂仪器 TTC染液(Sigma公司)；TUNEL染色试剂盒(Roche公司)；ELISA试剂盒(上海远慕生物科技有限公司)；BCA蛋白检测试剂盒(武汉博士德工程有限公司)；增强型ECL化学发光检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；TLR4、NF-κB p65,NF-κB p50、IκB抗体(Abcam公司)；荧光显微镜(Leica公司)；CO2恒温培养箱(Thermo公司) ......