倪 佳，徐莹莹，邓婉玲，宋苗苗，石 静，孙达权

    (1.贵阳市妇幼保健院·贵阳市儿童医院，贵州 贵阳 550001；2.宁波市第一医院 疝肝胆肛肠外科，浙江 宁波 315000；3.贵州医科大学 基础医学院，贵州 贵阳 550025)

    丝裂原活化蛋白激酶3(Mitogen-activated protein kinase 3，MAPK3)是由MAPK3 基因编码的一种分子量44 kDa的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，又名细胞外信号调节激酶1(Extracellular signal-regulatedkinase 1，ERK1)，是MAPK家族的重要成员之一，它通常与分子量42 kDa的丝裂原活化蛋白激酶1(Mitogen- activated protein kinase 1，MAPK1)共同组成MAPK1/3，是Ras(Rat sarcoma proto-oncoprotein)-MAPK信号通路的重要成员[1-3]。大量研究表明，MAPK1/3不仅参与细胞的多种生理功能，如细胞的生长增殖、迁移、分化、稳态调节和凋亡等，也与多种细胞病变有关，许多癌基因编码的蛋白可通过持续激活MAPK1/3，诱发肿瘤的发生发展和肿瘤血管生成等[4-7]。到目前为止，虽然有许多文献描述了MAPK1/3的生物学功能，但单独研究MAPK3对肝细胞癌影响作用的文献较少。本研究通过克隆人MAPK3基因和构建MAPK3基因稳转克隆肝细胞癌细胞株，研究MAPK3基因对肝细胞癌细胞生长增殖、迁移和侵袭的影响。

    1 材料与方法

    1.1 细胞 人永生化肝上皮细胞THLE-3(C4144)和人肝细胞癌细胞Hep 3B(SCSP-5045)分别购自上海冠导生物工程有限公司和中科院上海细胞库，均有STR鉴定结果。THLE-3细胞用含有10 %胎牛血清的RPMI-1640培养，Hep 3B细胞用含有10 %胎牛血清的MEM(minimum Eagle’s medium)培养，培养条件为37 ℃、5 % CO2。

    1.2 主要试剂 PrimeScriptTMIV 1st strand cDNA Synthesis Mix(6215A)、PrimeSTAR?Max DNA Polymerase(R045A)、TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0(9762)、DL10,000 DNA Marker(3584A)、pMDTM18-T Vector Cloning Kit(6011)、EcoR I(1040A)、XhoI(1094A)、T4 DNA Ligase(2011A)(TaKaRa ......