袁栋波,陈 瑶,龙兆钇,钟 源,谢 爽,黄俊琼

    (遵义医科大学附属医院 输血科,贵州 遵义 563000)

    流感病毒是流行性感冒的病原体,每年引起300～500万重症病例,导致30～60万人死亡[1]。血凝素(hemagglutinin,HA)是流感病毒表面一种重要的抗原,分布多种B细胞表位和T细胞表位。B细胞表位是病毒中和抗体的靶标[2]。T细胞表位可刺激T细胞,促进辅助性T细胞(Helper T cell,Th)分化。不同亚型流感病毒HA上存在数量不等的保守表位。由保守Th表位诱导产生的CD4+记忆T细胞受其他亚型流感病毒刺激后能迅速被激活,辅助B细胞或记忆B细胞产生抗体,在不同亚型流感病毒感染中提供保护[3]。H3N2流感病毒自1968年以来长期流行,每年冬春季节引起流行,以H3N2为主的流感季节有更多的住院病人和死亡人数[4-5]。本研究采用生物信息学预测和筛选H3N2病毒HA中保守Th表位,鉴定其免疫原性,探讨保守Th表位对CD4+T细胞活化及分化的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料 淋巴细胞分离液购自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司;RPMI1640培养基为Gibco公司产品;抗人CD4-FITC、CD3- PE-Cy5抗体购自Biotech公司;Brefeldin A、抗人CD69-PE-Cy7、IFN-γ-PE-Cy7和IL-4-APC抗体购自BD公司;表位由上海楚肽生物科技有限公司合成。

    1.2 方法

    1.2.1 HLA-DRB1表位预测 从全球共享流感数据倡议组织(Global initiative on sharing all influenza data,GISAID)数据库中下载以下流感病毒株的HA氨基酸序列:H7N9 A/Anhui/1/2013、2019～2020年度H3N2疫苗株A/Kansas/14/2017以及其他已发布的人源H7N9和H3N2病毒株,剔除相同序列和不完整序列 ......