周 钰,黎晓红,段亚菊,汤舒玲,罗 咏,王 简

    (华中科技大学 同济医学院附属梨园医院 皮肤美容科,湖北 武汉 430077)

    皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC)是起源于人皮肤表皮角质形成细胞或皮肤附属器的非黑色素瘤皮肤癌,虽然多数CSCC通过手术切除可以治疗,但仍有部分患者在术后极易复发和转移,即使在接受强化治疗后转移性患者的长期预后仍较差[1-2]。探讨CSCC转移的潜在机制对开发有效的CSCC治疗策略意义重大。长链非编码RNA(lncRNA)在肿瘤中表达异常,并通过调控靶微小RNA(miRNA)表达影响肿瘤细胞生物学行为,参与调控肿瘤进展,是肿瘤治疗的潜在靶点[3-4]。研究发现,lncRNA DNAJC3反义RNA1(DNAJC3-AS1)在骨肉瘤中表达上调,DNAJC3-AS1高表达可增强骨髓瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进顺铂耐药[5]。但DNAJC3-AS1在CSCC中的功能未见报道。miR-4319在结肠癌、食管鳞癌中表达降低,恢复其表达可抑制癌细胞增殖,改变细胞周期分布,抑制肿瘤形成[6-7]。lncRNA GNAS反义RNA1(GNAS-AS1)通过直接抑制miR-4319改变巨噬细胞M2极化,促进非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭[8]。靶基因预测到miR-4319是DNAJC3-AS1的潜在靶点,但DNAJC3-AS1是否靶向miR-4319调控CSCC进展尚未可知。本研究分析了CSCC组织中DNAJC3-AS1、miR-4319表达水平,并通过体外细胞实验验证DNAJC3-AS1靶向miR-4319在CSCC进展的功能。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 CSCC组织来源 随机选取2017年1月至2019年6月在我院确诊为CSCC并接受手术治疗的39例患者为研究对象。术前所有CSCC患者未接受任何抗肿瘤治疗。手术获得的CSCC组织和对应癌旁组织样本迅速置于液氮中冷冻,以后转移保存在-80℃冰箱直到使用。本研究方案经我院伦理委员会批准(NO:201601233),所有患者均签署书面知情同意书。

    1.1.2 细胞和试剂 CSCC细胞系A431(中国科学院典型培养物保藏中心);总RNA提取试剂盒、cDNA第一链合成试剂盒、2×Taq PCR MasterMix(北京天根生化公司);si-DNAJC3-AS1、si-NC、miR-4319 mimics、miR-NC、pcDNA-DNAJC3-AS1、pcDNA、anti-miR-4319、anti-miR-NC、荧光素酶报告载体(上海吉玛制药公司);Lipofectamine 2000(美国Thermofisher公司);细胞计数试剂盒(CCK-8)、磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)兔单抗(AF1186)、山羊抗兔IgG(A0208)、N-cadherin兔多抗(AF0243)、E-cadherin兔多抗(AF6759)均购自上海碧云天公司;Transwell小室(美国corning公司);双荧光素酶活性检测试剂盒(广州复能基因) ......