刘 军,冉 灿,曾定胜,奉友刚

    (遂宁市中心医院 泌尿外科,四川 遂宁 629000)

    肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)约占恶性疾病的3%,是泌尿系统恶性肿瘤相关死亡的第二大原因[1]。由于RCC发病机制不明,临床表现无特异性,早期诊断困难,肿瘤转移风险高[2]。到目前为止,手术切除仍然是唯一的治疗方法。对于晚期肾细胞癌患者,使用干扰素-α、IL-2、舒尼替尼和索拉非尼等药物进行全身免疫调节治疗具有一定的疗效。但是,肿瘤对这些药物的长期反应性较差,患者的存活率仅略有提高[3]。尽管在对该病的认识、诊断和治疗方面取得了显著的进展,但肾细胞癌患者的预后仍不令人满意。因此,仍需开发具有更好功效的新药,同时了解RCC肿瘤发生的机制将有助于药物的开发。透明质酸(hyaluronic acid,HA)是细胞外基质的重要组成成分,其调节组织硬度,维持基质稳态,并在许多类型的细胞中充当信号传导成分[4]。HA的生物合成受3种HA合成酶(HAS1、HAS2和HAS3)调节,其中透明质酸合成酶2(hyaluronic acid synthase 2,HAS2)途径是调控细胞恶性行为的主要信号通路[5-6]。HAS2先前已被证明在多种恶性肿瘤组织中表达上调,并且在肿瘤的进展和转移中起重要作用。例如,在乳腺癌细胞中,过表达HAS2可显著促进细胞迁移和侵袭能力[7]。HAS2在胰腺癌组织和细胞中显著上调,HAS2过表达可能是胰腺癌预后的重要标志[8]。HAS2表达升高与浸润性星形细胞瘤患者总生存期降低相关,是其独立预后因素[9]。然而,HAS2在RCC中的作用尚未见报道。因此,本研究将探讨HAS2在RCC细胞发生发展中的作用及其相关机制,为RCC的诊断和治疗提供生物标志物和潜在靶标。

    1 材料与方法

    1.1 试剂和仪器 人肾小管上皮细胞HK-2和RCC细胞系A498、786-O、Caki-1购自中国科学院细胞库;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)购自上海翌圣生物科技有限公司;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒购自北京利维宁生物科技有限公司;Trizol试剂购自美国Invitrogen公司;逆转录试剂盒购自日本TaKaRa公司;SYBR Green PCR Master试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司;上皮钙黏附素(epithelial cadherin,E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(neural cadherin,N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/Leukemia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白基因(Bcl-2 associated X protein,Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cysteine-containing,aspartate-specific proteases-3,caspase-3)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)、p-SMAD4抗体购自美国Cell Signaling Technology公司;NC-siRNA、HAS2-siRNA购自上海吉玛制药技术有限公司 ......