贾城壹,范 婵,卢 琴,王小素,闵 迅,黄 健

    (1.遵义医科大学附属医院 医学检验科,贵州 遵义 563099;2.遵义医科大学 检验医学院,贵州 遵义 563099;3.遂宁市中心医院 检验科,四川 遂宁 629099)

    霍乱弧菌是一种生存于水生环境的革兰氏阴性菌,根据表面O抗原结构不同,可分为200多种血清型[1]。其中O1和O139型霍乱弧菌主要导致流行性霍乱,这主要与它们表达霍乱毒素(cholera toxin,CT)和毒素共调节菌毛(toxin coregulated pilus,TCP)有关[2-3]。由于非O1/非O139群霍乱弧菌缺少CT和TCP毒素[4-5],因此不会引起流行性霍乱,但可引起胃肠炎和肠外侵袭性感染如脑膜炎[6]、菌血症、皮肤和软组织感染[7]等。近年来,非O1/非O139群霍乱弧菌引起的肠外侵袭性感染病例呈上升趋势,且显著高于O1和O139型霍乱弧菌侵袭性感染的报告病例数[8]。但目前关于非O1/非O139群霍乱弧菌的致病分子机制知之甚少。

    溶血素HlyA(hemolysin A,HlyA)属于细胞外成孔毒素家族,是霍乱弧菌的一个重要毒力因子,主要由El Tor生物型和非O1/非O139群菌株分泌[9],其具有多种生物活性,包括细胞毒性、肠毒性[10]、心脏毒性、溶血活性[11]和致死性等。本课题组前期研究证实,HlyA是非O1/非O139群霍乱弧菌肠外侵袭致病的决定因子[12]。我们还证实Ⅵ型分泌系统(Type VI secretion systems,T6SS)中的叉头相关结构域(forkhead-associated domain,FHA)蛋白TagH通过转录因子HlyU和Fur在转录水平协同调控hlyA的表达,并在翻译后水平通过蛋白酶PrtV调控HlyA的降解[12]。蛋白酶PrtV(vibrio cholerae protease,PrtV)属于金属肽酶M6家族成员,可降解哺乳动物血纤维蛋白溶酶原Ⅲ和细胞外基质复合物,也是霍乱弧菌的一个重要毒力因子[13]。本研究比较了tagH基因敲除菌株(ΔtagH菌株)、ΔtagHΔhlyA双敲菌株、ΔtagHΔprtV双敲菌株和野生菌株在小鼠肠道定植和致病力上的差异,以探究TagH对细菌毒力的影响,并初步明确溶血素HlyA和蛋白酶PrtV在此过程中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验菌株 非O1/非O139群霍乱弧菌HN375野生菌株(中国典型培养物保藏中心编号CCTCCAB2010414)为本实验室保存 ......