吴逐宇,何志旭

    (1.遵义医科大学 免疫学教研室,贵州 遵义 563099;2.遵义医科大学 组织损伤修复与再生医学省部共建协同创新中心,贵州 遵义 563099)

    EVs是细胞膜衍生而成的双层膜结构的囊泡状小体[1],在20世纪50年代被首次发现,当时被认为是一种源自血浆中血小板的颗粒[2]。EVs由真核、原核生物的细胞膜脱落或者由细胞主动分泌产生,是非复制性的膜封闭结构的异质囊泡群体[3-4],几乎所有(正常和病变)细胞类型都会释放[5-6]。EVs的分泌量受多种因素的影响,如微环境、葡萄糖和细胞内Ca2+水平等,几乎在所有体液成分中都可检测到它的存在,包括血液、尿液、汗液,甚至人的母乳[7]。

    细胞间信息交流在人体的发育、稳态维持以及疾病的发生发展过程中起着至关重要的作用。细胞之间的信息交流可以是局部的,也可以是远距离的,细胞的局部交流通过细胞之间的直接接触,如相邻细胞的间隙连接,使得信号分子在细胞之间传递;远距离的细胞通讯可以由激素等分子通过血液循环系统将信号分子传递到机体的其他细胞,EVs也可以介导远距离细胞信号传导,EVs作为载体将各种类型的细胞信号物质(如脂质、mRNA、miRNAs、蛋白质等效应分子)运送到受体细胞[8]。

    EVs是一种天然的细胞间物质运输工具,具有作为单药或联合治疗药物载体的潜力,特别是溶瘤病毒和化疗药物的联合给药[9-10]。EVs具有细胞靶向特性,它的细胞表面结构(如四倍体蛋白和整合素)可以引导EVs被特定的细胞摄取,并保护EVs包载的治疗药物不受机体免疫系统的调理作用和吞噬细胞识别,使药物具有更长的半衰期、减少对健康细胞和组织的毒副作用[11]。肿瘤来源的EVs具有包载药物能力强、半衰期长、副作用小、无免疫原性反应等特性是一种理想的药物载体[12-13],经过特殊处理的肿瘤源性的EVs,能够有机的与常规化疗药物以及溶瘤病毒等结合,形成以囊泡为载体的载药微颗粒[14-15]。靶向性EVs受到了广泛的关注,因其具有刺激机体再生以及可以通过机体生物屏障运载药物到病变部位的能力,使得其有望成为治疗各种疾病的新型策略[16-17]。

    1 EVs的分离提取

    由于EVs具有体积小、密度低等特性,导致其分离、提纯难度较大,目前分离、提纯EVs的方法很多,传统的分离方法大多基于EVs的体积大小和密度。目前常用技术有超速离心法[18]、流式细胞术[19]、密度梯度超离心法[20]、超滤法[21]、尺寸排阻色谱法和PEG沉淀法等。超速离心法被认为是EVs分离的金标准,可用于从大量样品中分离EVs,具有试剂用量少、重现性好等优点,但得到的EVs纯度不高,并且较为费时费力,对人员和设备要求很高,常适用于基础研究,不适用于临床;适用于临床检测的分离检测方法有:微流控技术、免疫生物芯片法、纳米流式法等[22] ......