杨登浩,唐 文,沈 雷,赵泽驹

    (1.遵义医科大学附属医院 泌尿外科,贵州 遵义 563099;2.遵义医科大学 外科手术学实验室,贵州 遵义 563099)

    输尿管超过15 cm的缺损为输尿管严重损伤,临床上主要采用回肠代输尿管治疗[1]。其术后黏膜相关并发症多以至改进不断,裁剪去黏膜回肠代输尿管前期研究显示效果较好[2]。模型犬术后第3个月开始发现代输尿管新生黏膜,形态类似小肠黏膜[3],部分样本新生黏膜与小肠黏膜形态结构差异较大,存在鉴定必要性;MUC2、UPK2分别为肠黏膜杯状细胞、尿路上皮细胞标记物;CK7、CK20在肠和尿路上皮中呈现不同表达,联合检测有助于上皮性质鉴定,本实验将通过检测上述指标加以鉴别,现报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料 实验用比格犬9只(由重庆沃森生物技术有限公司提供);切片机、冷冻台、漂烘仪、干燥箱、修复仪、脱色摇床、漩涡混匀仪、掌上离心机、移液枪、数字切片扫描仪、刀片、载玻片、盖玻片;苏木素染色剂、伊红染色剂、蒸馏水、二甲苯、多聚甲醛、无水乙醇、二甲苯、柠檬酸盐缓冲液、PBS缓冲液、DAPI染色试剂、正常山羊血清、一抗(CK 7;ABclonal,A12004)、一抗(CK20,ABclonal,A0248)、一抗(MUC2;ABclonal,A14659)、一抗(UPK2;ABclonal,A10813)、二抗(FITC标记山羊抗兔,Servicebio,GB22303)。

    1.2 方法

    1.2.1 模型建立与取材 比格犬术前禁饮禁食12 h,3%戊巴比妥肌肉注射麻醉,麻醉生效后仰卧位固定,术区备皮,消毒铺巾。经腹正中,从剑突至耻骨联合上方约4 cm进入腹腔,打开后腹膜,分离左侧肾蒂,止血钳钳夹肾蒂,切除左肾,4号丝线缝扎肾蒂近端;分离右侧输尿管,将输尿管与肾盂、膀胱连接处分别剪断,切除输尿管,膀胱输尿管残端结扎,形成输尿管全段缺损 ......