王攀登,刘 涛,2,张 天,吴 鲧

    (1.广西中医药大学附属国际壮医医院 心胸血管外科,广西 南宁 530001;2.广西医科大学第一附属医院 胸心外科,广西 南宁 530001)

    肺癌作为全球最常见的恶性肿瘤之一[1],主要包括小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)及非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)两大类,非小细胞肺癌中最为普遍的为肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)[2]。近年来,尽管各种诊断、治疗方法均有大幅度的提高,但肺癌患者的5年生存率仅为 16%左右[3]。G2期/S期应答相关蛋白1(G2and S phase-expressed-1,GTSE1)是由人GTSE1基因编码的细胞周期相关蛋白,主要调节G1/ S细胞周期的过渡[4]。研究表明GTSE1在几种癌症中都表现为表达上调,并且GTSE1的敲除能够减少癌细胞的增殖、迁移和侵袭[5-9]。GTSE1在肝细胞癌中与不良预后相关,预示GTSE1可能代表了有希望的分子靶标[10]。但是,GTSE1在肺腺癌中的表达情况、作用机制以及生存预后关系尚不明确。本研究分析了GTSE1在肺腺癌中的表达情况及与预后的关系,挖掘了GTSE1上游调控miRNA,并且通过体外实验验证了GTSE1的作用机制,目的是探索肺腺癌的发病机制,为靶向治疗提供新方向。

    1 材料与方法

    1.1 材料 胎牛血清、RPMI-1640培养基、细胞外基质凝胶购自美国Sigma公司;sh-NC、sh-GTSE1、oe-NC、oe-GTSE1、miR-218-5p mimic和mimic NC、miR-218-5p inhibitor和inhibitor NC均购自美国Genecopoeia公司;Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司;Trizol试剂、BCA蛋白检测试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific公司;逆转录试剂盒购自德国DBI Bioscience公司;SYBR-Green PCR Master Mix试剂盒购自德国QIAGEN公司;蛋白酶抑制剂购自中国博奥森公司;放射免疫沉淀实验缓冲液、细胞增殖试剂CCK8购自中国碧云天公司;PVDF膜上购自美国Millipore公司;一抗兔多克隆抗体GTSE1、双荧光素酶检测试剂盒购自美国Proteintech公司;一抗兔单克隆抗体GAPDH及二抗山羊抗兔IgG H&L(HRP)购自英国Abcam公司;pGL3启动子载体购自中国金斯瑞公司;海肾荧光素酶表达载体pRL-TK购自日本TaKaRa公司 ......