张 淼,高兴红,胡 源

    (1.武汉大学中南医院 神经内科,湖北 武汉 430071;2.遵义医科大学 基础医学院,贵州 遵义 563006;3.武汉大学中南医院 神经心理科,湖北 武汉 430071)

    慢性脑低灌注状态是血管性认知障碍及阿尔茨海默病共同的病理生理机制[1]。脑低灌注状态引起脑组织缺血缺氧,由此产生一系列病理生理过程,包括过量氧自由基的产生、继发性的神经炎症反应以及血脑屏障破坏,最终引起认知功能损害[2]。研究慢性脑低灌注有助于为相关痴呆的临床防治提供新对策。

    间断禁食(intermittent fasting, IF)即间断性在一段较长时间(一般为16或24 h)内不摄入或摄入极少能量,已被证明在包括阿尔茨海默病、缺血性脑卒中和帕金森病等多种神经疾病动物模型中具有神经保护效果[3]。本课题组之前的研究发现,脑缺血后间断禁食可以改善慢性脑低灌注大鼠认知损害,减轻海马神经损伤和降低炎症因子水平[4]。但间断禁食能否以及如何调节慢性脑缺血诱导的神经炎症反应,目前并不清楚。小胶质细胞和星形胶质细胞在中枢神经系统炎症反应中起主要作用[5-6],Liddelow等[7]研究发现,LPS诱导的神经炎症反应中,A1极化的星形胶质细胞而非小胶质细胞条件培养基对于神经元和少突胶质细胞前体细胞具有直接杀伤作用。此后的研究发现,星形胶质细胞A1极化现象广泛存在于衰老、帕金森以及阿尔茨海默等神经系统疾病中,改善星形胶质细胞极化可改善上述疾病动物模型的神经损伤[8]。本课题组前期研究发现,慢性脑低灌注可诱导海马星形胶质细胞A1极化[9]。间断禁食对CCH诱导的星形胶质细胞A1极化是否具有调节作用,目前尚不清楚。本研究拟探究间断禁食对CCH动物海马星形胶质细胞极化的影响,并构建离体慢性脑缺血模型,诱导星形胶质细胞极化,探讨其具体机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂 Ponesimod(Selleck,S8241);氯化钴(CoCl2,Sigma, C8661);小鼠小胶质细胞细胞系BV2及小鼠海马神经元细胞系HT22细胞购于普诺赛生命科技有限公司(Procell Life Science& Technology Co.,Ltd.);超滤管购买自Sigma(UFC-9010);Trizol试剂 (Invitrogen, CA, US No.155960 26);逆转录试剂盒(Vazyme Biotech Co, Nanjing, China No. Q311-02);DAPI(上海碧云天生物技术研究所);S1P1一抗购买自武汉三鹰生物技术有限公司,C3d抗体购买自R&D公司,其余Western Blot一、二抗及荧光二抗均购买自Abcam公司;CCK8试剂盒购买自Abbkine公司,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性试剂盒购买自南京建成公司 ......