卫麟娜,李 茂,刘利萍,冯继红,覃 明,高雪涵,董品志,张浪浪,罗军敏

    (1.遵义医科大学 基础医学院免疫学教研室,贵州 遵义 563099;2.温州医科大学附属第六医院,丽水市人民医院 肿瘤科,浙江 丽水 323000)

    结核病是由结核分枝杆菌(mycobacteriumtuberculosis, MTB)引起的累及机体多器官的慢性传染性疾病[1]。结核病的发病机制复杂多样且尚未完全阐明,当前大部分研究认为与免疫调控密切相关。MTB对巨噬细胞的免疫调控包括凋亡、自噬和极化。而其中巨噬细胞极化控制着结核病转归,其动态平衡可作为一种保护机制阻止过度炎症反应[2]。

    MTB的各类毒力因子可诱导巨噬细胞不同方向的极化,其休眠期高表达热休克蛋白(heat shock protein,Hsp)16.3保护自身抵抗巨噬细胞的清除。MTB Hsp16.3是MTBHspX基因编码,由144个氨基酸组成分子量为16.3 kD的小分子Hsps[3],可通过改变细菌结构长期存活于宿主恶劣的环境中[4]。MTB Hsp16.3可抑制巨噬细胞的凋亡和自噬,也可诱导巨噬细胞向M2型极化,调节巨噬细胞表面共刺激分子的表达,抑制NO、TNF-α的释放[5-7]。在我们前期的基因芯片筛选及信息学分析中发现MTB Hsp16.3重组蛋白通过CX3CR1诱导BMDMs向M2型极化[8]。又因肺泡巨噬细胞是机体抵抗MTB的第一道防线。所以,在MTB Hsp16.3重组蛋白处理肺泡巨噬细胞并检测其极化指标后,研究肺泡巨噬细胞表面CX3CR1对MTB Hsp16.3重组蛋白诱导极化的影响。采用100 ng/mL MTB Hsp16.3重组蛋白,探索其对肺泡巨噬细胞极化的影响,同时检测肺泡巨噬细胞中Fractalkine/CX3CR1的表达情况,并利用慢病毒载体下调肺泡巨噬细胞CX3CR1的表达,观察Fractalkine/CX3CR1在MTB Hsp16.3重组蛋白诱导肺泡巨噬细胞M2型极化的作用及调控机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 6～8周龄雌性C57BL/6小鼠购于长沙市天勤生物技术有限公司,实验动物生产许可证号:SCXK(湘)2019-0014,按照遵义医科大学实验动物饲养管理条例,饲养于遵义医科大学医学生物中心SPF级实验室。本研究方案获遵义医学院动物实验伦理委员会批准,伦理审批编号:伦审〔2018〕2-221号 ......