消癌舒来源于贵州省少数民族民间验方,主要由斑蝥、牡蒿、牛蒡3味药组成,具有“破血逐淤,散结消癥,攻毒蚀疮”等功效[1-2]。民间使用发现其对宫颈癌具有显著疗效,故拟作为6类新药进行研发。目前缺乏对消癌舒用药安全性评价的研究,根据《药品注册管理办法》[3],消癌舒属于未在国内上市销售的由中药、天然药物组成的非注射给药复方制剂,处方符合中医药理论,有一定的民间用药经验,故采用啮齿类动物,按拟临床给药途径(口服)进行急性毒性及长期毒性研究进行药物安全性评价。通过急性毒性试验观察小鼠的外观、活动情况、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应,通过长期毒性试验观察消癌舒长期给药后对大鼠体质量、摄食量、血液学、血清生化、脏器系数及组织病理学的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 雌性KM小鼠60只,体重(20±2)g,由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供,合格证号为SCXK(渝)2007-2006;雌性SD大鼠120只,体重(200±20) g,由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供,合格证号为SCXK(渝)2012-0005;饲养于遵义医科大学基础药理教育部重点实验室SPF级动物房。动物实验符合动物伦理要求。

    1.2 试剂与仪器 消癌舒胶囊(由贵州景红生物科技发展有限责任公司提供,批号为20130911,规格为0.4 g/粒)。倒置显微镜(日本 OLYMPUS公司);全自动生化分析仪(日本日立公司);组织脱水机(德国 Leica公司);石蜡包埋机(德国 Leica公司)。

    1.3 急性毒性试验

    1.3.1 测定半数致死量(LD50) 雌性KM小鼠40只,分别编号并输入Excel表格,通过计算机产生随机数字进行随机分组,每组10只,分别为消癌舒2.36、2.94、3.68、4.6 g/kg组,禁食不禁水12 h 后,单次灌胃给药,每次0.2 mL/10 g,观察小鼠一般情况(体重、饮食、皮毛、行为、分泌物、排泄物等)及中毒、死亡情况,连续观察14 d[4]。

    1.3.2 最大耐受量实验 雌性KM小鼠20只,消癌舒27.6 g/kg,分3次灌胃给药,给药容积0.4 mL/10 g(最大给药容积),观察小鼠的外观、活动情况、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应(中毒反应的症状、严重程度、起始时间、持续时间、是否可逆)等,连续观察14 d,并计算小鼠消癌舒的最大耐受量倍数,小鼠的最大耐受量倍数=每只小鼠的耐受药量/小鼠的平均体重(20 g)×成人的平均体重(50 000 g)/成人每日用量(倍) ......