罂粟科多刺绿绒蒿(Meconopsishorridula) 是一年或多年的草本绿绒蒿属植物。这种植物一般生长在海拔3 600～5 100 m的草坡上,产于我国的云南、四川、青海、甘肃和西藏等地,在尼泊尔、锡金、不丹也有分布[1-2]。《藏药志》中将绿绒蒿属植物记载为藏药“吾巴拉”,入药部位为全草或地上部分,性寒、味苦、有小毒,具有清热、止痛、活血化瘀等功效,可有效清除体内的过氧自由基,抑制细胞的退化、衰老及癌症的发生,还具有保护急性心肌缺血的作用,临床上主要以复方形式入药[3-4]。绿绒蒿属植物是野生高山花卉,具有“高山牡丹”的美誉,其化学成分主要包括挥发性成分、黄酮类化合物、生物碱等[5-7]。目前有研究表明可从该植物中检测到42种生物碱,其中包括碎叶紫堇碱、原鸦片碱、二氢血根碱、小檗碱等[8-11]。

    研究显示糖尿病(diabetes mellitus,DM)、颅内动脉瘤(intracranial aneurysm,IA)、慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)和动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aneurysmal subarachnoid hemorrhage,aSAH)的发病均与氧化应激(oxidative stress,OS)密切相关[12-15]。在一般情况下,机体内的抗氧化作用与氧化作用处于一种平衡,然而由于某种因素导致机体内抗氧化与氧化作用失衡,倾向于氧化,即产生氧化应激[16]。有研究表明绿绒蒿中的总生物碱具有较强的抗氧化活性[17-19],故本研究采用高效液相色谱串联质谱联用技术(HPLC-MS/MS)对多刺绿绒蒿中碎叶紫堇碱的含量进行测定,通过薄层生物自显影技术(TLC-Bio)判定其抗氧化活性,运用网络药理学筛选出碎叶紫堇碱干预氧化应激性疾病的潜在作用靶点和成分,分析潜在作用靶点参与的通路,解释碎叶紫堇碱辅助治疗以上4种氧化应激性疾病的作用机制。为多刺绿绒蒿中生物碱治疗氧化应激性疾病的基础药理学提供方向和参考。

    1 材料与方法

    1.1 仪器 百万分之一电子天平(TOLEDOXR6TUD5,梅特勒托利多科技有限公司);万分之一电子天平(BSA224S,北京赛多利斯科学仪器有限公司);高效液相色谱-质谱联用仪(AB Sciex API4000,美国AB Sciex公司);超纯水机(UPR-II-20L,四川优普超纯科技有限公司)。

    1.2 实验药材与试剂 碎叶紫堇碱(AF21020908,成都埃法生物科技有限公司,纯度98%);2,2-联苯基-1-苦肼基自由基(C10505863,上海麦克林生化科技有限公司);多刺绿绒蒿(由重庆市中药研究院刘翔副研究员鉴定基原);10 cm×20 cm薄层板(青岛邦凯高新技术材料有限公司);乙腈和甲醇(色谱纯,美国TEDIA公司);其余实验所用试剂均为国产分析纯 ......