先天性巨结肠症(hirschsprung’s disease,HD)是常见的小儿遗传疾病[1-2],临床症状主要表现为胎便排出延迟,粪便瘀积导致肠梗阻及结肠肥厚扩张,严重者可导致爆发性小肠结肠炎,若不及时采取治疗措施,可能威胁患儿生命[3]。因此,探究HD发病的相关因素并及时采取干预措施,对于改善患儿预后至关重要。多项研究认为,HD是由多种低外显致病基因协同作用造成的遗传性疾病[4-5],其主要病理机制为神经调节蛋白通路的失调。NRG1和NRG3基因均属于神经调节蛋白(NRGs),可参与调控神经角质细胞的生长、增殖与分化等,在上皮、肌肉细胞的增殖与分化中发挥重要作用[6-7]。与NRG1类似,SOX10对于形成和维持发育后期胶质细胞的特性至关重要,有学者在HD患者的无神经节细胞肠段中观察到SOX10的异常表达[8]。上述研究证实HD的发病与NRG1、NRG3和SOX10基因表达密切相关,但其基因多态性对HD发病的影响相关研究较少,现基于MiniSeq基因测序技术对HD患者NRG1、NRG3和SOX10基因多个位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)进行检测,探讨基因多态性与HD发病的相关性,具体报道如下。

    1 资料与方法

    1.1 对象 选择本院在2019年2月到2023年2月期间确诊为HD的患儿74例作为病例组,并将同期83例健康儿童纳入对照组,病例组患儿年龄为2个月～10岁,平均年龄(4.83±1.34)岁;对照组体检儿童年龄为3个月～9岁,平均年龄(4.22±1.10)岁。纳入标准:①HD诊断参考《先天性巨结肠的诊断及治疗专家共识》[9];②研究对象家属签署知情同意书;③研究对象均具有完整的临床资料。排除对象:①样本采集前接受药物治疗;②内分泌相关病史者;③配合度较低者。本次研究应用的治疗方案经东莞市第八人民医院伦理委员会的审核批准(审批号:DEPH190211)。

    1.2 方法

    1.2.1 临床资料收集 收集患者基本资料用于本次研究,包括性别、母亲年龄、父亲年龄、其它先天性疾病、母孕期主/被动吸烟、母亲接触有毒物质、父亲接触有毒物质、母孕期合并症、母孕期患病史、家庭先天性畸形史、家庭恶性肿瘤病史及家庭顽固性便秘史。

    1.2.2SOX10、NRG1和NRG3基因单核苷酸多态性检测 利用生物信息数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/)查找目的基因的多态性位点,本研究选取SOX10多态性位点rs139884,3个NRG1多态性位点rs2439302、rs7835688和rs16879552,3分NRG3多态性位点rs10748842、rs10883866和rs6584400,釆用PCR扩增目的基因,再对所选SNP位点进行分型分析 ......