张万林,李一村,杨宏宇,

    (1.遵义医科大学 口腔医学院,贵州 遵义 563099;2.北京大学深圳医院 口腔医学中心,口腔颌面外科,广东 深圳 518036)

    口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)是最常见的恶性肿瘤之一,占口腔部位恶性肿瘤病例的90%以上[1]。口腔鳞癌是一种对人类健康构成严重威胁的疾病。据2020年全球185个国家的统计数据,每年口腔癌的发病数量超过37万例,死亡人数超过17万例,严重威胁了人类的健康[2]。多数口腔鳞癌患者在初诊时已经进展到中晚期,手术切除配合放射治疗和化学治疗是主要的治疗方式[3]。目前,以顺铂为基础的化疗方案是临床上的首选治疗策略,在多数患者中可见到较为显著的治疗效果[4]。然而,部分患者表现出对顺铂化疗的耐药性,这成为了严重影响患者5年生存率的关键因素[5]。因此,研究和克服顺铂相关的化疗耐药性,已成为口腔鳞癌治疗领域中迫切需要解决的问题。顺铂耐药机制涉及复杂的生物学过程,如DNA损伤及修复、上皮间充质转化、药物代谢以及细胞凋亡途径的改变等[6]。目前口腔鳞癌细胞对顺铂耐药的具体分子机制尚未完全阐明。

    RNA-Seq技术,作为近年来高通量测序技术的主要代表,能够在较短时间内全面检测和量化组织或细胞中数以万计的基因表达水平,进而深入解析药物作用引起的组织或细胞表型及其功能变化[7]。本研究利用转录组测序技术结合生物信息学分析,挖掘与顺铂抗药性密切相关的候选基因及其潜在信号传导途径,旨在为口腔鳞状细胞癌的抗药性机理研究提供新的视角和策略。

    1 资料与方法

    1.1 构建耐药细胞模型 如图1所示,从野生型(Wild type)口腔鳞癌细胞系HN6-WT(获赠于北京大学口腔医学院)出发,实验组以低浓度(1 μmol/L)顺铂进行处理。与此同时,对照组加入等量的顺铂溶剂(无菌水)。每日监测两组细胞状态,分别每3 d更换1次培养基。在适当的时间点进行细胞传代,以进入下一阶段培养。随后,将实验组的顺铂浓度升至1.5 μmol/L进行处理,每天观察细胞状态,于适当时间去除顺铂后,每3 d更换1次培养基。这一过程持续14 d。随后,依此类推,逐步提高顺铂浓度,直至达到4 μmol/L。在此期间,对照组同步处理及传代后标记为HN6-WT_Control。在扩大培养后,将两组细胞冻存于-80 ℃以进行保种。 ......